0.05％胰蛋白酶-EDTA（1X），酚红

细胞培养常见问题及其解决

-15 ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 12. 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？ 一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53 mM EDTA Na4。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于-20 ℃，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。 13. 欲将一般动物

流式细胞术样本制备技术

的 PBS)离心洗涤 1~2 次； 若悬液中有明显的沉淀块，需用 200~300 目的滤网过滤后再用细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS)洗涤 1~2 次； 用细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS)调整浓度至 1x107/mL 备用。 六、贴壁细胞的制备 吸除培养基上清液，用含无钙、镁离子的PBS漂洗一次； 以 25 mL 培养基为例，加入 1 mL 消化液（0.1%胰蛋白酶），置室温（25℃）或 37℃ 消化 2~5 min；或者加入 1 mL 的 EDTA

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

，Rb，TopoismeraseⅡ 等。 2、酶消化方法 常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃，切片也预热至 37℃，消化时间约为 5~30 分钟（胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从 0.05% 至 0.25% ）； 胃蛋白酶消化37℃ 时间为 30 分钟。皂素（Saponin）：一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin 溶液，消化时间为室温孵育 30 分钟。 适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen