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文献和实验,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA; 6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA; 7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟; 8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味. 注:第3,第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。 PCR纯化试剂盒操作流程: 1.溶液PE使用前应加入适量体积95%-100%的乙醇,混匀。 2.向200μl二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB,混匀。 3.加入spin
等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟; 5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA; 6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA; 7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟; 8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味. 注:第3,第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。四
糖凝胶上检测分析。如图一所示 图一:2.2 超声破碎后,8000g,30秒,4°C,离心。将上清移入新的管子中。开始准备进行染色质免疫共沉淀(IP)。2.3 每份超声样品取50ul,这时的样品标记为INPUT,用于定量DNA浓度和作为PCR的空白对照。超声后的染色质应立刻冻入液氮中或者储存于-70°C可储存2个月。避免多次反复冻融。3检测DNA浓度1INPUT样品用于为后来的IP样品计算DNA浓度。DNA可采用PCR纯化试剂盒(加入70ul洗脱液,接着进入3.2a)或者采用酚/氯仿抽提(加入350ul
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