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- 百奥莱博
- WE0308-VTO
- 北京
- 2025年07月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
389
- 英文名：
eECL Western Blot Kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
2～8℃，避光
- 规格：
50ml|250ml
特别提示：包括高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒
英文名称：eECL Western Blot Kit
产品货号：WE0308
产品规格：50ml|250ml
高灵敏度化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的高灵敏增强型检测试剂盒。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成，在HRP的催化下产生高强度的信号，能够检测pg级别的抗原。灵敏度高、发光信号强烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
试剂盒组成：
| 组成 | 50ml | 250ml |
| eECL-A(Luminol Enhancer) | 25ml | 125ml |
| eECL-B(Peroxide) | 25ml | 125ml |
注意事项：
1、在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。
操作步骤：
1、二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量，将eECL-A和eECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 胶片反相(白色条带，黑色背景) | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 膜上出现棕色或黄色条带 | ||
| 暗室中看到强烈发光 | ||
| 发光信号持续时间过短 | ||
| 信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP 过多，消 耗底物过快，引起信号迅速降低 |
稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 | |
| 蛋白转移率低 | 优化转移系统 | |
| 高背景 | 系统中HRP 过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 封闭不足 | 优化封闭程序 | |
| 封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 | |
| 冲洗不充分 | 增加冲洗时间，次数 | |
| 曝光过度 | 减少曝光时间 | |
| 抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 | |
| 蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
| 膜未平衡 | 按照说明书处理膜 | |
| 胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 | |
| 出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短) |
系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
| 出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常) |
一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
| SDS 导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
储存条件：2～8℃，避光保存
我公司销售的高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒报价，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）-底物化学发光 ECL 法
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与 Southern 或 Northern 杂交
方法也不同，常用的检测系统有化学发光检测（ECL）和化学显色 DAB 检测系统。 化学发光检测（ECL）： 利用 HRP 催化化学发光物质，生成一种不稳定的中间物质，其衰变时在暗室内形成明显的肉眼可见的化学发光带，利用 X 胶片感光 原理，将结果记录下来。 ECL 显色试剂配制：化学发光底物 A 和 B 按照 1：1 比例等体积混匀。 将混合好的显色底物覆盖印迹膜 1-5 min，黑暗条件下观察荧光效果。 在暗室可用放射自显影胶片或化学发光成像系统记录结果 。 如采用放射自显影胶片，曝光几秒
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