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文献和实验(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温(60℃ -70℃)有效地逆转录mRNA,从而消除了5'端由于高CC含量导致的mRNA 二级结构对逆转录的影响;改进之四是采用热启动PCR (hot start PCR)技术和降落PCR(touch down PCR)提高PCR反应的特异性。 随着RACE技术日益完善,目前己有商业化RACE技术产品推出,如CLONTECH的MarathoTM技术和SMARTTM RACE技术。邢桂春等(2001)先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应,结果发现使用
(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温h (60 度 -70度 )有效地逆转录mRNA,从而消除了5‘端由于高CC含量导致的mRNA 二级结构对逆转录的影响;改进之四是采用热启动PCR (hot start PCR)技术和降落PCR(touch down PCR)提高PCR反应的特异性。随着RACE技术日益完善,目前己有商业化RACE技术产品推出,如CLONTECH的MarathoTM技术和SMART TM RACE技术术。邢桂春等(2001)先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应
MgCl2,dNTP每个200 µM,引物每个400 nM ]进行扩增,其中分别是AAP和引物TSC-2-2826(A带)或引物TSC-2-1732(B带)一起使用。 优化5′RACE的TdT加尾条件 发现有几个因素影响cDNA 3′末端加尾效率:1)RNA的存在抑制TdT;2)缓冲液成分和反应条件;3)TdT的数量和纯度;和4)cDNA 3′末端的二级结构。 虽然TdT不能用RNA作为底物,但RNA的存在能够抑制酶活性,在添加0.01mg这么少的RNA,就能够导致加尾寡聚核苷酸数量较少和加上的核苷
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