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- 百奥莱博
- ALH268-EYG
- 北京
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
First strand thermostable reverse transcriptase PCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20μl×25次|20μl×50次
特别提示：包括耐热第一链反转录PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：耐热第一链反转录PCR试剂盒
英文名称：First strand thermostable reverse transcriptase PCR Kit
产品货号：ALH268
产品规格：20μl×25次|20μl×50次
本试剂盒以RNA为模板，用耐热反转录酶/RNase抑制剂混合物、2×RT Reaction Mix高效合成第一链cDNA，操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。 同时经过多点突变，提高了反转录温度耐受性，可以在45-55℃进行反转录。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。同时更高的反转录温度大大的提高了GC含量高，二级结构丰富的RNA模板的反转录效率。
试剂盒组分(50次)：
耐热反转录酶/RNase抑制剂混合物-—————50μl
2×RT Reaction Mix-———————————500μl
Oligo(dT)18(0.5 μg/μl)-————————50μl
Random primer (N6)-———————————50μl
RNase free H2O-—————————————1ml
注意事项：
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
储存条件：-20℃，有效期1年。
本制品别名：高效耐热反转录试剂盒|耐热RT-PCR试剂盒
我公司销售的耐热第一链反转录PCR试剂盒北京价格，高效耐热反转录试剂盒，耐热RT-PCR试剂盒质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验产物的 DNA:RNA 杂交链变性后利用大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段或反转录酶合成 cDNA 第二链，最后用对单链特异性的 S1 核酸酶消化该环，即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应，而且用 S1 核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于 mRNA 5' 端序列出现缺失和重排，因而该方法目前很少使用。 2、置换合成法： 该方法利用第一链在反转录酶作用下产生的 cDNA:mRNA 杂交链不用碱变性，而是在 dNTP 存在下，利用 RNA 酶H在杂交链的 mRNA 链上造成切口
退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成双链靶DNA， 最后扩增靶DNA。cDNA第二链的合成方法有以下几种: 1、自身引导法 合成的单链cDNA 3'端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物，当第一链合成反应产物的DNA:RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段或反转录酶合成cDNA第二链，最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环，即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应，而且用S1核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于mRNA 5'端序列出现缺失和重排
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以Oligo(dT)30 MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下，反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5‘末端时自动加上3一5个(dC)残基，退火后(dC)残基与含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接头引物配对后，转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头(figure 2 )。然后用一个含有部分
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