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文献和实验等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极,pH值逐渐增大。如前所述,蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征,这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动,直至某一pH位点时失去电荷而停止移动,此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电
胶中,并减少蛋白形成聚集体。 7.IPG 胶条水化后可自动进行等电聚焦电泳。 8.暂时不进行第二向的IPG 胶条可夹在两层塑料薄膜中于-80 °C 保存几个月。 注意:不推荐每条IPG 胶条的电流超过50μA,因为这有可能产生过多的热量且有可能损坏胶条和槽,IPG 胶条甚至会烧胶。 二、不加样品水化 (一) 标准型胶条槽: 1.用适量的水化液进行胶条水化,方法同步骤3-5,水化过夜。 2.于胶条糟的加样孔中加入浓缩的样品。每个加样孔的一侧可加入7.5ml样品(每个加样
等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。 ⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极,pH值逐渐增大。如前所述,蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征,这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动,直至某一pH位点时失去电荷而停止移动,此处介质
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