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文献和实验生成全长转录组 使用 Ambion 转录试剂盒合成的大多数 DNA 模板都可以生成全长转录组,无需任何优化。然而,一些模板可能产生过早终止的产物,如较小的离散带或拖尾/降解产物。对于印迹杂交,通常不需要全长 RNA 探针。然而,对于许多其他分析,至关重要的是转录进行到模板的末端,全部生成同一种大下的转录组(例如 NPA,体外翻译研究和结构分析)。转录反应失败或不良的两个最常见因素是标记核苷酸中的抑制剂和质量较差的 DNA 模板。应执行一系列简单的实验来确定转录反应失败的原因;随附的流程图概述
的因素有很多,从样本的质量,引物探针的设计,再到 PCR 反应体系中各组分的比例优化等。当我们准备好了这些,在上机检测时又要根据实验目的正确完成程序设置,才能最终得到良好的实验结果。那么今天我们就从荧光定量 PCR 软件程序设置入手来介绍一下这其中需要注意的一些方面。 Part 1:规范正确的新建实验方式 当我们准备好样品开始进行上机测试时,第一步就是新建实验。此时我们可以通过点击 Advanced Setup(图 1A,图中红框)或 Create New Experiment(图 1B,图中
时。要检测细胞培养物是否被病毒感染,可以使用电子显微镜观察、用抗体组合进行免疫染色、ELISA 检测或是使用合适的病毒引物进行 PCR 扩增。 支原体 支原体是无细胞壁的简单细菌,被认为是最小的自我复制生物。由于支原体非常小(通常小于 1 µm),因此很难被检测到,除非它们达到了极高的密度,导致细胞培养物变质;在此之前,通常没有明显的感染迹象。一些生长缓慢的支原体可在培养物中持续存活,而不会导致细胞死亡,但它们可以改变培养体系中宿主细胞的行为和代谢。慢性支原体感染的可能表现包括:细胞增殖率降低
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