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文献和实验作为亲和标签(后者包含2个Strep-tag®II,中间加入spacer间隔开来)。这两种标签都可与改造后的链霉亲和素(Streptavidin)上的生物素结合位点相结合,通过使用脱硫生物素或生物素,即可将Strep-tag®标签蛋白洗脱下来。 由于His-tag系统具有吸附量大,性价比高,和可以在变性条件下进行蛋白纯化等优点,使其为大众所熟知。而Strep-tag®系统则可以获得高纯度的蛋白,但其同时也可以耐受多种缓冲液的使用。下面让我们对二者进行各项数据进行比较: 耐受的纯化条件 下表
,但其同时也可以耐受多种缓冲液的使用。下面让我们对二者进行各项数据进行比较: 耐受的纯化条件 下表为 His-tag 与 Strep-tag® 系统的耐受缓冲液对比:如果分离纯化膜蛋白或包涵体时,则纯化过程需要涉及到变性条件。 Strep-tag® 系统最多允许的尿素浓度为 6M,盐酸胍为 1M,而 His-tag 则为 8M 和 6M。如若需要增加蛋白的溶解度,使用去垢剂,则两种系统均可兼容 Triton-X100,Tween 20 和 Nonidet P40。 但不是所有的蛋白过表达
问:我现在正在做神经细胞的培养,听说木瓜蛋白酶的消化作用比较好,购买后发现,不是简单的用三蒸水配制,有哪位高手能告之一二,万分感谢!答:我也用的sigma的木瓜酶,用hepes缓冲液很好溶的,一直没发现溶解度低的问题。其实关于酶的选择,也不能简单的看消化作用如何,还要考虑到实验设计,比如说胰酶的消化效果总体尚可,特点是消化出的细胞电生理状态稳定,膜状态较好,但是胰酶对某些蛋白损伤很大,比如NMDA受体,如果楼主的实验设计是培养细胞后进行NMDA受体电流的记录,那么选胰酶就不是上策;而且从产量
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