血块基因组DNA提取试剂盒北京厂家

特别提示：包括血块基因组DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血块基因组DNA提取试剂盒
英文名称：BloodClot Blood DNA Extraction Kit
产品货号：WE0185
产品规格：50次

  本试剂盒供了一种快速、简单、高效的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液，也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后，DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后，高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶抑制剂和其他杂质的残留，A260/A280的比值在1.5-2.3。DNAzuì长可达50 kb，适用于PCR，Real-time PCR、Southern blotting等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GC	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer PW2(浓缩液)	18ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DC及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃，另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。

操作步骤：
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液，然后再加入180μl Buffer GTL。
注意：若样品数量较多，蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合，然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中，剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟，期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC，彻底涡旋混匀。短暂离心后，70℃孵育10分钟，期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意：加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀，大部分情况下，在孵育过程中，沉淀会消失，沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇，轻轻颠倒混匀样品，室温放置5分钟。短暂离心，将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意：
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时，需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置2-5分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE，室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置5 min后再次离心；若洗脱体积小于20μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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