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文献和实验。 (13)显影和定影: I 将ECL Plus 显色液的A 液和B 液在容器里体积混合,根据膜的大小来确定显色液的量,1 min 后,将膜与显色液充分接触。 II 反应1 - 5 min 后,吸去膜上残余液,将膜转移至一干净保鲜膜上,包好,放入压片夹中。 III 剪一张比膜尺寸稍大的X 光片,打开压片夹,将X 光片放在膜上,一旦放上,便不能移动。关上压片夹,开始计时。 IV 根据信号强弱调整曝光时间,一般1 - 5 min,也可选择不同时间多次压片以达最佳效果。 V 曝光结束后,打开压片夹
每块胶 15mA 恒流电源;根据预染 Marker 和目的蛋白的分子量大小的相对位置判断最佳跑胶时间,以使目的蛋白处于分离胶面的下 1/3 的最佳分辩位置。转膜:将 PVDF 膜放到甲醇中浸泡 2 min将转膜夹打开,在代表负极的黑色面铺上一块湿润的海绵垫,再添加 2 层湿润的滤纸,将 SDS-PAGE 胶小心地铺在滤纸上,表面再覆盖大小合适的 PVDF 膜;然后再覆盖两层湿润滤纸,再垫上湿润的海绵垫,将红色的正极板合上,夹好,插入转膜槽相应的位置。转膜过程在 4℃ 进行,采用 100V/100
。将膜浸润底物中 1 分钟,然后取出,用滤纸吸掉膜上多余的底物。 用 x-ray 底片曝光,根据信号的强弱适当调整曝光时间,一般为 1 min 或 5 min,也可选择不同时间多次压片,以达最佳效果;曝光完成后,打开 X-光片夹,取出 X-光片,迅速浸入显影液中显影,待出现明显条带后,即刻终止显影。 Western blot 常见问题分析指南 为什么电泳的条带很粗? 电泳中条带很粗是常见的事,主要是未浓缩好的原因。 处理办法:适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的 pH 正确;适当降低电泳时的电压
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