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      北京百奥莱博科技有限公司

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    • 规格

      200U

    特别提示:包括UDG酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


    产品名称:UDG酶
    产品货号:JN0059
    产品规格:200U

      UDG酶分子量25KDa,能特异性识别DNA单链或双链中的尿嘧啶残基,并从DNA上水解去除尿嘧啶残基,防止DNA发生突变,是碱基切除 修复过程中的重要组分,对RNA无活性。

    产品用途
    UDG酶常被用于消除PCR扩增中的残余污染。在PCR反应液配制时,将dUTP和dTTP 按一定的比例混用,使得扩增产物都含有脱氧尿嘧啶。在进行PCR扩增前,在PCR混合液添加UDG酶,并增加2分钟37℃~50℃的保温步骤即可消除以往PCR产物的残留污染,由于UDG在PCR循环中的94℃dU的PCR产物。

    使用建议
    UDG酶在Taq酶反应缓冲液中同样具有活性。在PCR反应液中直接添加UDG酶即可,推荐用量为0.2U每50μl体系,在PCR循环程序前增加2分钟37℃ ~50℃保温及可完全消除多达1ng含UTP模板的污染。

    应用示例
    UDG酶特异性降解含UTP的DNA模板

    反应体系:
    加入物 加入量
    2×Taq MasterMix 25μl
    500bp模板(含UTP) 1ng
    500bp扩增引物对 终浓度0.2μM
    250bp模板(无UTP掺入) 1ng
    250bp扩增引物对2 终浓度0.2μM
    dH2O 至50μl

    对照组未添加UDG酶,实验组每50μl反应体系中添加0.2U UDG酶。

    PCR循环程序
    50℃ 2分钟(降解含UTP的 污染模板)
    94℃ 4分钟(灭活UDG酶)
    30次循环 94℃,30秒
    57℃,30秒
    72℃,30秒
    72℃ 5分钟
    4℃ 保温



    图例1) 结果显示:UDG酶能特异性降解含UTP的DNA模板并阻止其 PCR扩增,且不影响正常模板的PCR 扩增反应。
    泳道M:DL2000 泳道1,2:对照组,未添加UDG酶
    泳道3,4:实验组,0.2U UDG酶处理

    活性定义:60分钟内催化1nmol尿嘧啶从含尿嘧啶双链DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。

    常用PCR残余污染消除体系:
    加入物 加入量
    5×Taq Buffer with Mg2+ 10μl
    上游引物 0.2-1.0μM (终浓度)
    下游引物 0.2-1.0μM (终浓度)
    dATP, dGTP, dCTP 各0.2mM(终浓度)
    dTTP 0.1mM(终浓度)
    dUTP 0.2mM(终浓度)
    如全部使用dUTP替代dTTP 0.4mM(终浓度)
    模板 1-50ng(质粒)
    10ng-1μg(基因组)
    Taq 0.25μl(1.25U )
    ddH2O 至50μl
    UDG酶 0.2U,如残余污染严重可适量增加酶用量


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