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- CA0077
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- 2026年01月13日
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- 文献和实验
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100ml
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文献和实验；3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700×g，离心 10 min。如果样品溶解得不好，再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液，重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质，重复抽提一次，将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中；4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇，12 000 rpm 离心 2 min；5. 用 70% 乙醇洗涤，晾干，沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋
切割成大小约0.5cm×0.5CM、厚为0.1cm的小块，再用金刚砂轮磨成厚约10—50μm（以便在相差显微镜下观察）的薄骨片。使用前用超声波清洗仪超声洗涤3次，每次约10min。然后依次浸泡在3个盛有含青霉素（1000IU/ml）、链霉素（1000μg/ml）、两性霉素B（3μg/ml）的抗生素溶液的小容器中，每次10—20min。最后可浸于盛有含抗生素的培养液的容器内，置4℃（短期）或-20℃（较长期）冰箱内保存备用； 2. 取生后3—5d的大鼠，拉颈处死后置于盛有75%酒精的容器中，消毒
实验材料： 1. 骨髓来源：骨髓材料由健康人提供； 2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100µg/ml链霉素，pH7.2； 3. 分离液：密度为1.073g/ml的Percoll溶液； 4. DMEM-LG培养液：含1000mg/L葡萄糖的DMEM培养液，补充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100µg/ml； 5. 消化液：为0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液； 实验
