B载体北京现货

特别提示：包括B载体在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：B载体
英文名称：Magic Vector B
产品货号：BTN51104
产品规格：2μg

本产品是专门用于高效快速克隆平末端DNA片段的专用载体,它是由Sma I酶切ClionG载体后经过纯化得到的即用型线性载体。跟ClionG载体一样，本产品带有自杀基因，Sma I位点位于该基因之中，只有当外源平末端DNA 插入片段插入Sma I位点,连接后的DNA转化的细胞才能生长,所以最后得到的转化子几乎都是含有平末端DNA 插入片段的重组子。

产品特点：
1. 即用性，可以直接用于连接反应，免去繁琐的酶切，电泳检测，纯化，去磷酸化，再纯化等步骤。
2. 具有Clion-G载体的所有优点，包括零背景,适用于所有E.Coli菌株,多拷贝的colEI型复制起始位点。
3.高效率，由于自杀基因的使用有效地减除了载体自身环化对平末端DNA 克隆的影响，自身环化得到的转化子在有选择液存在时只占总转化子的1%-5%。
4. 应用广泛，可用于克隆酶切产生的平末端DNA，Pfu酶扩增的PCR片段，cDNA片段，3′和5′RACE片段，Taq酶扩增的PCR片段(部分为平末端)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

自备试剂：
1.外源DNA片段。如果含又DNA片段的反应液中不含其他载体DNA(如酶切反应液，PCR反应液)，可以不需要凝胶回收,灭活酶后即可直接将反应液用于连接反应。PCR引物5′端一般为OH基团，最好在PCR后用T4 激酶磷酸化，否则连接效率极低。
2.感受态宿主菌。DH5α，DH10B或HB101等常用E.coli菌株。
3.连接反应试剂。请购买现成试剂盒。
4. 选择培养基。在倒LB 平板之前随产品赠送的选择液和Amp(如果附赠的选择液含Amp,则不必须额外加Amp)按比例加入到LB 之中,使选择液终浓度为1×，Amp 终浓度为50μg/mL(如果附赠的选择液含Amp,稀释到1X后Amp的终浓度即为50μg/mL),混匀后倒盘。

使用方法：

1.连接反应
a. 取新的经过灭菌处理的0.5mL Eppendorf 管,编号。
b. 将100 ng载体DNA转移到无菌离心管中，加两倍摩尔量的外源DNA片段，折合成重量(ng)=(外源DNA片段bp 数X 100 ng×2)/5330bp(载体DNA 长度)
c. 加蒸馏水至体积为8μl，于45℃保温5分钟，使重新退火的粘端解链。将混和物冷却至0℃。平末端DNA片段的克隆可以省去45℃保温5分钟这一步。
d. 加入10×T4 DNA ligase buffer 1μl，T4 DNA ligase 0.5μl，混匀后用微量离心机将液体全部甩到管底，于16℃保温1-24小时。
e. 同时做只有外源DNA片段没有质粒载体的组对照反应。没有必要做只有质粒载体而无外源DNA的对照组，因为自身环化的载体不能生长，能够生长的转化子基本上是两个载体分子相互连接形成的新载体。但在有两倍于外源DNA片段存在的情况下,两个载体分子连接的机率很小。
2. E.coli感受态细胞的转化
a. 各取每组连接反应液2μl按标准方法转化E. coli感受态细胞。
b. 每组连接反应转化原液取100μl用无菌玻棒均匀涂布于筛选培养基上，37℃下培养半小时以上,直至液体被完全吸收。

MCS位点：


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