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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
204
- 英文名:
DNA Marker(200bp~4kb)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃可保存一年以上,4℃
- 规格:
50次(300μ)|200次(4×300μl)
参照物片段(bp):200,400,600,800,1000,1200,1400,1600,1800,2000,2200,4000。
本产品为即用型产品,已含有1×Loading Buffer,可根据实验需要,直接取3-6μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。若上样量为6μl,则1000 bp带约为100ng,其余带约为50 ng。
条带图:6μl加样,凝胶长度10cm,电压8V/cm,0.5×TBE Buffer
贮存液组成:
10mM Tris-HCl (pH 8.4),10mM EDTA,0.02%溴酚兰,5%甘油
储存条件:-20℃可保存一年以上,4℃保存三个月。
使用方法:
1.取3-6μl本产品加入琼脂糖凝胶的加样孔中进行电泳(每1mm点样孔宽度加1 μl,如果加样孔较宽,可适当增加上样量)。
2.建议电泳条件为0.7-1.5%琼脂糖凝胶,正负极之间电压4-10 v/cm。
3.通过EB染色,在紫外灯下观察电泳条带。
注意事项:
1.本产品可直接使用,不要加热。
2.及时更换电泳缓冲液并使用新制的凝胶,以免影响电泳结果。
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文献和实验细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300kbp长的DNA大片段, 或180~200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。细胞经处理后,采用常规方法分离提纯DNA,进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色,在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder.如果细胞量很少,还可在分离提纯DNA后,用32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记,然后进行电泳和放射自显影,观察凋亡
;还有一个原因是你设置的电压太高,最好是2~4v/cm,跑4~6小时比较合适(2)“我是按说明书上0。8%的琼脂糖”:凝胶浓度太低了,把凝胶浓度加大到2%,放心做,没问题的(3)“说明书上说混合温和”:那是怕你混匀太剧烈导致细胞基因组DNA断裂啊,注意很轻轻的混匀(4)“收集凋亡细胞时离心时转速”:我在实验室中是5000rpm,离心5min,我觉得足已mmyycc :我的ladder总是只有一条带,与对照组差别不大,用的是100v,1-1.5h,不知道是不是这个原因?溴酚兰跑到什么位置合适
;6. 4000 rpm,4 ℃ 离心 10 min 回收细胞,弃上清,每 50 mL 原培养物再加入 2 mL 冰冷 100 mM CaCl2 溶液悬浮细胞;7. 按每份 200? 滋 l 分装,4 ℃ 可保存 1~2 周。若需长期保存,可加甘油至终浓度为 15%,置-70 ℃ 备用。【注意事项】大肠杆菌必须从 LB 培养基琼脂平板上获得单菌落,37 ℃ 过夜培养 12~16 h,第二天按 1~5% 接种,直至 A600 值为 0.5~0.6;(二)重组质粒的转化1. 将感受态细胞置冰上融化,然后加
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