cDNA第一链合成试剂盒北京现货

特别提示：包括cDNA第一链合成试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：cDNA第一链合成试剂盒
英文名称：Reverse Transcriptase Kit
产品货号：WH0097
产品规格：25次|100次

本试剂盒是是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的，具有高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly（A)+ RNA合成第一链cDNA。该试剂盒中使用的逆转录酶Quant Reverse Transcriptase与通常使用的Moloney鼠白血病病毒来源的MMLV和鸟成髓细胞病毒来源的AMV不同，是一种使用大肠杆菌工程菌进行重组表达的全新高效逆转录酶。该酶能够高效转录多种RNA模板，最大限度将RNA转录成cDNA第一链。

产品特点：
·反转录效率可达90%。
· 37℃一步完成整个实验。
·可通读GC含量高、二级结构复杂RNA模板。
·对后继的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合各种PCR耐热聚合酶。

产品应用：
·适合于反转录模板量为50ng-2μg的总RNA。
·实时荧光定量RT-PCR。
·半定量PCR反应。
· 3"-，5"- RACE等。
 

组分	25次	100次
Quant Reverse Transcriptase	25μl	2×50μl
Oligo（dT)15（10μM)	60μl	240μl
Random（10μM)	60μl	240μl
10×RT Mix	50μl	200μl
RNase-Free ddH2O	1ml	2×1ml
Super Pure dNTPs（2.5mM each)	60μl	240μl

储存条件：20℃保存。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2．RNA样品要避免基因组DNA污染。
3．避免多次反复冻融RNA。
4．试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。
5．cDNA产物应置于-20℃保存。

操作步骤：
下列操作步骤适用于模板量为50ng-2μg的总RNA，如果总RNA量大于2μg，请按比例扩大反应体系。

1．将模板RNA在冰上解冻；引物、10×RT mix（其中包含RNasin和DTT）、Super pure dNTP混合液、RNase-Free ddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
2．按照表1的逆转录体系配制混合液，彻底混匀，涡旋振荡时间不超过5min。简短离心，并置于冰上，RNA模板请于第4步加入。
  注意：如果下游进行荧光定量PCR实验，建议使用10μl逆转录反应体系，各反应组分相应减半。从而可以与SuperReal PreMix Plus（WH0103&WH0104）以及QuickFire qPCR PreMix（WH0105&WH0106）的反应次数匹配。
3．如果要做多个逆转录反应，可以将配制好的混合液后分装在单个反应管中，置于冰上。
4．将模板RNA（50ng-2μg）加入到混合液中，彻底混匀，涡旋振荡时间不超过5 sec，简短离心以收集管壁残留的液体。
5．37℃孵育60 min。
6．将逆转录的产物进行后续PCR反应和荧光定量PCR反应。

表1：逆转录反应体系：

加入物	加入量	终浓度
10×RT Mix	2 μl	1×
Super pure dNTPs（2.5mM each）	2 μl	0.25mM each dNTP
Oligo-（dT)15或Random（10μM)*	2 μl	1 μM
Quant Reverse Transcriptase	1 μl	（20 μl反应体系)
RNase-Free水	X μl
模板RNA，在第4步加入	X μl
总体积	20 μl

*也可根据实验具体需要，加入基因特异性引物

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