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- 2025年07月10日
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文献和实验）以及SYBRTMGreen I相似。这使得该染料可以直接用于配置了488nm氩离子激光器或者此光谱区域内任何可见光激发装置的仪器。EvaGreenTM本身没有荧光，但和dsDNA结合后能发出高亮度的荧光，这种特性使它特别适合于实时定量PCR（qPCR）的应用。 EvaGreenTM20×溶液专为qPCR设计。当使用热启动Taq聚合酶时，需要对PCR缓冲液中离子强度和pH值进行调整以充分发挥EvaGreen的优点。例如，使用化学修饰的Taq聚合酶，如AmpliTaqGold，可能需要降低KCl浓度同时升高
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2）RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 具体操作：取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中，加入 800 μl Trizol 试剂，充分混合，裂解 10 min，12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3）反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA
ChamQTM/AceQ® QPCR Master Mix 5 ml 可供 20 μl 体系 500 次反应。 模板的上样量 若直接使用 cDNA 原液作为模板，建议使用体积不超过 qPCR 反应总体积的 1 / 10！ 当复孔之间重复性不佳时，可将模板做适当稀释后以大体积加入反应体系，可有效提高实验重复性。看小 V 做的实验，是不是重复性爆表啊～～～ 预变性时间 常见的 qPCR 试剂预变性时间从 30 sec - 15 min 不等。科学家们为了封闭常温下酶的活性，使 qPCR 产生
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