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上海烜雅生物科技有限公司
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56
- 运输方式：
常温运输/干冰运输
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出15ml离心管，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时以稳定细胞状态，然后离心换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
待细胞达到一定密度（不超过1x10^6/ml）可按照以下方法换液培养或传代。
方法①：收集细胞，1000rpm离心5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法②：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：
1）将细胞悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
2）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
3）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含10ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
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文献和实验视网膜母细胞瘤是起源于视网膜的胚胎性的眼内恶性肿瘤。本病与遗传、染色体畸变、病毒感染有关。患者９０％为３岁以内婴儿，少数发生于大龄儿童，偶见成人。无种族及性别差异。多单眼发病，约占７０％，双眼同时或先后发病者约为３０％。双眼发病者全部及单侧患者中的１０—１５％多具有遗传性，属常染色体显性遗传，外显率不全，故表面正常，带有致病基因的父母不一定发病，但可以有患病的子女。在我国有家族史者占２．５％—３．５％。染色体研究也证明部分患者有染色体的异常，发现１３号染色体长臂缺失或基因
视网膜AAV怎么选？RPE、RGC、感光细胞的血清型、启动子与递送方式
视网膜AAV选型不能只看“AAV2、AAV8还是AAV9”。更完整的逻辑是：研究目标 → 靶细胞 → 启动子 → 血清型 → 递送方式 → 后续验证。 1. 视网膜研究常见靶细胞有哪些？ 常见研究对象包括： 视网膜色素上皮细胞（RPE） 视杆细胞 视锥细胞 视网膜神经节细胞（RGC） 视网膜血管内皮细胞 视网膜感光细胞 穆勒胶质细胞 第一步应先确定目标细胞，再考虑血清型和启动子。 2. 不同视网膜细胞可参考哪些血清型和启动子？ 根据原文图表整理： 靶细胞 血清型参考 启动子参考
吸出培养瓶中的培养基，用PBS液洗涤1-2次； 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可）； 在镜下看到细胞退缩变园，立即给予少量培养基终止消化，我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化； 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：2或1：3分瓶即可。
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