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- 百奥莱博
- BTN170403-QTY
- 北京
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
One-tube RT Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃
- 规格：
10次
特别提示：包括一管式反转录试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：一管式反转录试剂盒
英文名称：One-tube RT Kit
产品货号：BTN170403
产品规格：10次
本产品是一管式反转录预混Mix，内含反转录第一链合成所需的所有试剂(MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer等)，用户只需加入模板 RNA和RNase-Free 水即可进行反应。
产品特点：
1. cDNA的合成更加方便，用户只需准备模板和水即可进行反应。
2.快捷，操作步骤已经zuì大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3. 效率高，特殊优化的oligo dT和N6 随机引物配比，反转录效率高。
4. 速度快，只需42℃，20分钟即可完成cDNA 第一链的合成。
5. 能够用于GC含量高，二级结构复杂的RNA 模板，合成cDNA片段长度可达12kb。
6. 兼容性好，合成的cDNA可直接用于荧光定量PCR反应，灵敏度高、稳定性好。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 2×RT MasterMix | 0.1ml |
| RNase-Free 水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1. 解冻后颠倒轻弹混匀各组分，以20μL 体系为例，按下表加入(2×RT Master Mix很粘稠，取用前请短暂离心，并避免吸头外壁沾附损失)：
2×RT MasterMix
| 10μl | |
| Total RNA/mRNA 模板(自备) | 50ng-2μg/5-200ng |
| 补RNase-Free 水到 | 20μl |
注意：对于二级结构很复杂的RNA 模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟后迅速转移到冰上，再进行下一步操作。
2. 轻轻混匀，42℃孵育20分钟进行反转录反应。
注意：对亍二级结构复杂或者GC含量高的模板，可以提高温度至50℃，以增强反转录效率。
3. 85℃加热5秒钟灭活反转录酶置冰上备用(更长时间保存请置于-20℃)。
注意事项：
1. 实验过程中请注意避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。
2. 使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度丌均影响实验结果。
3. 使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
5. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70℃加热5-10分钟后再加入体系。
6. 操作人员请带口罩和一次性手套，并经常更换手套。
我公司销售的一管式反转录试剂盒北京供应商，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
，TIANGEN），将基因组DNA去除完美整合到反转录步骤中，采用全新的gDNase Buffer，可3 min快速去除基因组DNA残留，操作简便，无需氯仿抽提纯化步骤；而后利用高效FastQuant RT Enzyme完成cDNA第一链的合成及gDNase灭活仅需18 min，并且所有反应均在同一离心管中完成，大大简化了操作步骤，节省了时间，被称为“21 min的一管式革命”。 图2 图3 高质量cDNA应能准确反映样本真实的转录情况 RNA纯化方法多种
下，trizol类方法无法防止多糖多酚对于RNA/DNA分相的干扰，要么残留大量DNA，要么残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物，氧化破坏RNA，或者残留这些多糖多酚，色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制，市面上绝大多数的国产厂家是使用trizol的方法进行改良，无论是不是加了离心柱。但是实践证明，改良不能从根本上解决问题。判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。 第二种试剂盒失败的原因：直接裂解过柱
mRNA差异显示技术是由美国波斯顿Dena-Farber癌症研究所的Liang Peng博士和Arthur Pardee博士在1992年创立的。它也称为差示反转录PCR（differential display of reverse transcriptional PCR）简称DDRT-PCR。mRNA差异显示技术是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，具有简便、灵敏、RNA用量少、效率高、可同时检测两种或两种以上经不同处理或处于不同发育阶段的样品
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