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- 百奥莱博
- BTN80912-FLB
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
396
- 英文名：
Mass-plasmid DNA column extraction kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
RNaseA溶液需-20℃
- 规格：
5次
特别提示：包括大提柱式质粒DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：大提柱式质粒DNA提取试剂盒
英文名称：Mass-plasmid DNA column extraction kit
产品货号：BTN80912
产品规格：5次
本试剂盒是用于质粒DNA大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，zuì后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全套操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从50-100mL 过夜培养的菌液纯化得到高达300-500μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280= 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
试剂盒特点：
1．快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2．纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
3．产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
4．用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5．价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 溶液B | 30ml |
| RNase A溶液(10mg/mL) | 0.15ml |
| 溶液C | 40ml |
| 大提离心吸附柱 | 5套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml×2 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：RNase A溶液需-20℃保存，其余成分可室温或4℃保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。
使用方法：
1. 用250mL离心管收集100-300mL菌液，5000rpm离心10分钟，去除上清。
2. 往细菌沉淀中加入6mL溶液A，充分振荡悬浮(第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均匀，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存)。注意：充分重悬细胞沉淀使之无细胞结块状物对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 加入6mL溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放置5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
4. 加入冰浴的8mL溶液C，颠倒混匀，冰上放置10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
5. 6000rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
6. 将上清液(约20mL)转移到离心吸附柱中，放入50mL 套管中。
7. 6000rpm离心5分钟，质粒DNA 将与离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
8. 将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
9. 重复上步一次，即将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
10.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步对去除残留通用洗柱液很重要，否则通用洗柱液会影响DNA的使用。
11. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中，加1mL DNA洗脱液2.0(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
12. 本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强，所以再用1mL DNA 洗脱液2.0洗脱3-4次才能把绝大部分质粒DNA 洗脱下来。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA 洗脱液不够，可以用自备的DEPC 水代替。
注：一般情况下，第一次洗脱可以洗脱约25%的质粒DNA；第二次洗脱可以洗脱约35%的质粒DNA；第三次洗脱可以洗脱约20%的质粒DNA；第四次洗脱可以洗脱约10%的质粒DNA；第五次洗脱可以洗脱约8%的质粒DNA。
13. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。如果需要使用液相内毒素清除剂清除质粒DNA中的内毒素，可以直接将此步所得的DNA溶液用于去内毒素处理。如果DNA浓度太低，可以另购本公司的核酸浓缩剂进行浓缩。
注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．溶液A：溶液B：溶液C的比例为3：3：4。若细菌量增大，需按此比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA变性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。100mL高拷贝的菌液一般能得到700-1500ug质粒DNA，100mL低拷贝的菌液一般能得到150-350ug质粒DNA。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。
我公司销售的大提柱式质粒DNA提取试剂盒北京厂家，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验等。 PCR 产物 两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连 T 载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连 T 载体。因为 PCR 产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个 bp，带形没啥变化。连 T 载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，再说 PCR 那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动
2, 其它稳定剂和增强剂 三DNA提取相关产品 1.柱式小量质粒DNA抽提纯化试剂盒：MTL001-1 50次 79元 2.DNA胶回收试剂盒： MTL002-1 50次 89元 3.动物DNAout（动物DNA提取试剂盒）：3670-10 10 ml 90元 4.植物DNAout（植物DNA提取试剂盒）：3672-10 10次 90元 5.血液DNAout(血液DNA提取试剂盒)： 3671-10 10 次 90元 6.革氏阴性细菌DNAout提取试剂盒： 3673-10 10 次 90元
酶切，切完一个纯化后再切：温度要求不同，先酶切低温要求的，再酶切高温要求的；若盐浓度要求不同，先酶切低盐浓度要求的，再酶切高盐浓度要求的。5、 若质粒是在TE中保存的，TE 中的EDTA可能与酶的激活因子螯合，影响酶切效果，可放大酶切体积或重新浓缩质粒。6、 限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。7、 纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式，推荐柱式
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