核酸酶去除试剂北京供应商

PCR 抑制物的来源与一般作用机制

。DNA 的一级结构不稳定，会因为水解、非酶甲基化、氧化损伤和酶降解等出现降解。 细胞中存在核酸酶，如果核酸酶处理不干净，残留在纯化的核酸样本中，从而降解靶核酸。微生物如细菌产生的限制性内切酶也会是一个降解 DNA 的因素。有些细菌的 DNA 酶属于热稳定的核酸酶，在扩增中期可水解基因组和引物 DNA。 核酸和引物也因为其不能与 DNA 聚合酶结合而出现不扩增。如蛋白质、多糖、细胞碎片、脂类等对 PCR 的抑制作用，很可能就是通过对 DNA 的物理包裹作用而使其不能与聚合酶接触。 乳胶

mRNA富集还是rRNA去除

化到相似的浓度水平。最后，剩余的 cDNA 分子在 PCR 反应中被扩增以生成可测序的文库（图 2）。   图2 | 使用双链特异性核酸酶 (DSN) 处理酶法去除丰富的序列。 DSN 处理应用广泛，特别是用于注释的测序流程，DSN处理被普遍使用。它可用于从特征较少的物种中获取转录组信息，这些物种无法使用使特定探针进行靶向去除高丰度转录本的方法，以及不具有 poly(A) 尾而无法通过 poly(A) 选择富集 mRNA 的物种(3) . 因此，一些 RNA-Seq 试剂盒及常用的去除方法

反转录过程中需要考虑哪些因素？

的实验室器具和试剂以及对实验区域进行去污处理。 根据来源材料（如血液、组织、细胞、植物）的类型和实验目标，有多种 RNA 分离和纯化方法可供选择。分离纯化过程的主要目标是稳定 RNA 分子、抑制 RNA 酶，并通过适当的储存和提取方法最大程度提高产量。最佳的纯化方法可以去除干扰酶活性的内源性化合物，如植物组织中的复合多糖和腐殖酸，以及反转录酶的常见抑制剂，如盐、金属离子、乙醇和苯酚。纯化的 RNA 应保存在 -80°C，尽量减少反复冻融。 纯化后评估 RNA 质量和数量的方法有许多种。常用