大肠杆菌W3110菌种现货供应

大肠杆菌细胞超声波破碎

琼脂 ，制成固体培养基，用作菌种活化与保藏)。 三、操作方法 1、细胞培养 和收集：将活化菌种接入肉汤培养基中，于37℃振荡培养。当到达对数生长期后(约6h)，用离心机 收集细胞，8000r/min离心5min，或3000r/min离心20min。 2、在显微镜下观察细菌 的形态特征。 3、细胞破碎：取湿细胞50-100mg悬浮于1ml细胞破碎缓冲液中。用20kHz频率，150W的功率，在冰浴中进行超声波破碎，每破碎60s，间隔60s，反复

手把手教你做好体外 DNA 重组

，例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等，常用的载体一般为质粒；根据需要可直接从公司购买合适的载体，也可以自己构建。（3）连接：目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体，使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同，产生三种连接方式：粘端连接、平端连接和不相配的连接。（4）转化：将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞，使其在宿主细胞内复制扩增或表达，赋予宿主细胞新的生物特征。（5）克隆化：重组 DNA 分子转化大肠杆菌后，在平板

E. coli K-12限制外源DNA

生物(16)，但是不包括重要的实验有机体果蝇(17)和 酿酒酵母(18)。此外，此类菌种还应在胞嘧啶甲基转移酶造就新物种(19)或者保护cDNA免受酶切消化(20)过程中使用。由于甲基化腺嘌呤在许多细菌和低等真核细胞中存在，因此，从这些有机体中克隆基因组DNA时也应考虑到Mrr介导限制。 以下情况无须考虑E. coli K-12的限制： 大肠杆菌克隆复制后，外源甲基化模式将会丢失(获得大肠杆菌的甲基化模式)，除非克隆载体本身具有甲基转移酶活性。一旦成功导入，克隆可在Mcr+ Mrr+ 大肠杆菌菌株