BMGY/BMMY培养基基础

酵母表达

经过不断的努力，终于得到酵母表达阳性结果。特把表达的一些心得写下来，希望对正在努力中的XDJM有所帮助，也以此感谢丁香园对我的帮助。分泌型载体：pPICZaC 宿主菌：X33 培养基：BMGY/BMMY 目的蛋白：20KD1、表达过程中防止污染是第一关键，酵母太容易污染 了。在用BMGY激活培养时，可进行挑单菌落培养24h,而不用常规的1％接种。摇床可定期用75％酒精喷洒消毒。2、如果只是检测用，用试管小量培养。先前用250ml的锥形瓶培养，既浪费材料，又耗费精力。目前表达出来的蛋白就是在试管

酵母表达外源蛋白

浓度。一般用Mut+表型的较多，但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好，只有试试才知道你的蛋白用那种菌株表达较好。 11、培养基 YPD：最基本的培养用；BMGY：诱导表达前培养用；BMMY：诱导表达用；MD：电转化后筛选his＋用。 YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。不过有一种方法是可行的，就是用YPG培养基代替，只是把YEPD中的葡萄糖用3%的甘油代替，也可以降低成本。摇瓶毕竟不能和发酵罐比，甘油残余会抑制甲醇利用

毕赤酵母蛋白不表达的原因

交换，结果就是产生Mut+和Muts表型的菌株;前者在甲醇诱导表达时生长快，消耗的甲醇多，后者生长慢，消耗的甲醇少，所以诱导表达时Muts表型要求更高的菌体浓度。一般用Mut+表型的较多，但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好，只有试试才知道你的蛋白用那种菌株表达较好。 11、培养基 YPD：最基本的培养用;BMGY：诱导表达前培养用;BMMY：诱导表达用;MD：电转化后筛选his+用。 YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导