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文献和实验聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)
1.学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。 2.掌握聚丙烯酰胺园盘电泳的操作技术。 3.比较醋酸纤维薄膜电泳与本法分离血清蛋白质的效果。 二、原理: (一)盘状电泳原理 盘状电泳是在区带电泳原理的基础上,以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物,采用电泳基质的不连续体系(即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH的不连续性及电位梯度的不连
注射器(50μl) (7)其他:玻棒、大培养皿等 3.试剂 贮液配制方法见表2。 表2 聚丙烯胺凝胶电泳贮液配制方法 四、操作步骤 1.贮液配制 按上表配制贮液,但应注意 (1)配好的贮液用棕色瓶盛装置冰箱内保存,可放1~2个月。 (2)过硫酸铵应当天配制。 (3)如有不溶物要过滤。 (4)显色液用前再混和。 (5)电极缓冲液用时稀释10倍。 2.电泳槽的安装 垂直板电泳槽的式样很多,目前流行的是用有机玻璃做的两个“半槽”组成的方形电泳槽,中间夹着凝胶模子,是由成套的两块玻璃
聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)(图)
续性(discontinuity),凑巧分离出的区带也很象圆盘状(discoid shape),取“不连续性”及“圆盘状”的英文字头“disc”。因此,英文名称为disc electrophoresis,中文直译为盘状电泳。仪器装置:(见图15-1)。上下两个槽为圆形或方形,其中注入缓冲液。上下槽的缓冲液中分别有正、负电极通入。上槽底部有很多小孔,可插入装有聚丙烯酰胺凝胶的玻璃管。这里仅以Davis和Orstein(1964)用分析血清蛋白的高pH的不连续系统为便说明其基本原理。此系统是一个高pH的碱性系统,或称阴离子
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