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文献和实验【共享】RNA抽提实验注意事项,以及各种RNA的抽体的常用方法及步骤,还有质量鉴定的几种方法
8.0)0.05%SDS用于配制洗脱缓冲液的Tris. Cl 和EDTA贮存液应为新近高压的溶液 可用适量的灭菌水稀释上述贮存液配制洗脱缓冲液。洗脱缓冲液不能高压处理,因高压会使溶产生大量气泡。8)收集液置于透明的小溶器内,测定OD260, 使用前比色杯须用浓盐酸:甲醇(1:1)浸泡1小时,再用经DEPC处理并高压处理过的水彻底冲洗合并含有RNA的洗脱组分。经上述一轮oligo(dT)-纤维素亲和量层析后得到的RNA中,带与不带poly(A)的RNA,其含量近乎相等。如欲进一步纯化mRNA,可将洗脱液于65
步骤: (1)在已置于冰浴中的灭菌离心管中加入下列试剂: RNA或mRNA 10.0ml 合适的产物(1mg/ml) 10.0ml 1mol/L Tris・Cl(pH7.6) 2.5ml 1mol/L KCl 3.5ml 250mmol/L MgCl2 2.0ml 5mmol/L dNTP 10.0ml [a-32P]dCTP 10.0ml 0.1mol/L DTT 2.0ml Rnasin
eppendorf管),离心管架。 二、设备 微量取液器(20μl,200μl,1000μl), 台式高速离心机,恒温振荡摇床, 高压蒸汽消毒器(灭菌锅), 涡旋振荡器, 电泳仪,琼脂糖平板电泳装置和 恒温水浴锅等。 三、试剂 1、 LB液体培养基(Luria-Bertani) :称取蛋白胨(Tryptone)10 g,酵母提取物(Yeast extract) 5 g,NaCl 10 g,溶于800ml去离子水中,用NaOH调pH至7.5, 加去离子水至总体积1升,高压下蒸气灭菌20分钟
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