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- 2025年10月31日
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文献和实验液裂解细胞，用移液器适当吹打使细胞脱落，大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解，裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理：先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基，每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min，取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周，-20℃ 可保存约 2 个月，-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定：酶标板，酶标仪、离心机、1 mg/mL
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
95℃的温度煮沸混合好的 BSA样品、预染标记和 ProMarker，5分钟。 •向凝胶中装载样品前，用100μl的移液器轻轻抽放缓冲液冲洗井孔让样品孔更平滑。在把样品放入凝胶前，做简单离心与混匀保证蛋白溶液浓度不变。在每个孔中注入10μl的蛋白质样品（图 12）。 •将安全盖安装到槽顶部，并将电极导线连接至电源（图 13）。 •开始电泳：90 V运行60分钟，130V再运行60分钟。 •电泳后，将胶铲插入到两玻璃板之间，轻轻来回撬动直到两板分开，把凝胶从玻璃板上移
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