无菌培养基方瓶;血清瓶500ML

重组腺病毒构建、扩增及纯化

培养基中，37℃振摇过夜。 （2）接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基，37℃振摇，至OD600 达到0.4. （3）迅速将培养物置于冰浴中30min，至充分冷却。 （4）将菌液转移至预冷的离心管中，4℃下以2500r/min离心15 min，弃培养液，回收细胞。 （5）以10ml预冷的10%甘油洗涤沉淀，低温离心，共两次。 （6）加约1ml（适量）预冷的10%甘油重悬沉淀，稀释悬液100倍，测量OD600,至稀释浓度为2-3×1010个细胞/ ml （1.0 OD600约

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作

用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。 5.      胶回收线性化质粒，以备共转化使用。 二 共转化 1  大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 ²       从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB培养基中，37℃振摇过夜。 ²       接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基，37℃振摇，至OD600 达到0.4。 ²       迅速将培养物置于冰浴中30min，至充分冷却。 ²     

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

小鼠肿瘤样本制备 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死，75% 酒精浸泡 5 min，取出小鼠置于无菌操作台上。 左手持镊子，右手持弯剪，沿肿瘤边缘剪下长约 1cm 的口子，可清晰看见肿瘤附着于皮下，沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处，剥离肿瘤。 将剥离的肿瘤放入100 mm 的培养皿中，并在室温下加入 5~10 mL 的 1640 基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 待所有肿瘤剥离完毕后，将肿瘤转移至 1.5 mL EP 管中，手持弯剪将肿瘤充分剪碎，边剪边加入1640基础培养基，静置数秒