1冻存管5ML/灭菌平底外旋盖

细胞培养从头学——入门篇

。 （三）无菌操作的演示 1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面。 2.靠近酒精灯火焰操作。 3.器皿使用前必须过火灭菌。 4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 三、器械的清洗和消毒 （一）玻璃器械洗消 新的玻璃器皿的洗消 1.自来水刷洗

支原体污染的特点及检验（1）

之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。 o 如果细胞发生微生物污染时， 应如何处理？　　直接灭菌后丢弃之 o 支原体 (mycoplasma) 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？　　不能。 除极有经验之专家外， 大多数遭受支原体污染的细胞株， 无法以其外观分辨之。 o 支原体污染会对细胞培养有何影响？　　支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为 mycoplasma-free，实验结果之数据方有意

培养细胞的保存和复苏

长期保存。（4）复苏：急速融化复苏可防止损害细胞。冻结细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分钟内融化。2、冻存与复苏方法适用于原始组织、原代细胞和细胞系（株）。（1）细胞用胰蛋白酶+EDTA消化后用冻存液稀至2~5X106/ml。（2）分装于2ml冻存管中，装量1ml，封口，作好标记，用几层纱布扎好。（3） 冻存管进入液氮前应有一个渐降温的过程，以1℃/min的速度降温，一般挂在液氮上空8小时后，投入液氮贮存罐中长期保存。（4）为使冻存的细胞复苏，将冻存管置于37℃~43℃水浴中，充分