细胞核/浆蛋白抽提试剂盒价格

特别提示：包括细胞核/浆蛋白抽提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
英文名称：Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
产品货号：WE0265
产品规格：50次

  本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。zuì后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer A	50ml
Buffer B	3ml
Buffer C	25ml
Protease Inhibitor Cocktail	750μl

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：2～8℃

注意事项：
1、如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
2、所有样品操作请置于冰上进行。
3、可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Buffer A:Buffer B:Buffer C=100:5.5:50。
4、可以采用更高的速度来离心。

使用方法：

一、细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
1、请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷
2、收集细胞，计数。离心去上清。
3、1×107细胞中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。
注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

二、组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1、取材，保存组织。
2、在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷。
3、称组织重量，每100 mg组织中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20分钟。
注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

储存条件：-20℃

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