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- 库存:
339
- 英文名:
BCA Protein Assay Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
500次微孔板(50管次)
特别提示:包括BCA蛋白定量试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:BCA蛋白定量试剂盒
英文名称:BCA Protein Assay Kit
产品货号:WE0276
产品规格:500次微孔板(50管次)
BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液,测定范围为20~2000μg/ml。
试剂盒组成:
| 组成 | 规格 |
| BCA-A | 2×50ml |
| BCA-B | 3ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
保存条件:BSA Standard Solution:2~8℃,其它组分:室温
注意事项:
1、本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
2、建议每次测定蛋白样品时,绘制标准曲线,以获得准确数据。
3、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释)。
4、如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1),可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(WE0275)或其他蛋白定量产品。
使用方法:
1、稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
| 管号 | 稀释液用量(μl) | BSA标准品用量(μl) | BSA标准品zuì终浓度(μg/μl) |
| A | 0 | 100 | 2 |
| B | 200 | 200 | 1 |
| C | 200 | 200(从B管中取) | 0.5 |
| D | 200 | 200(从C管中取) | 0.25 |
| E | 200 | 200(从D管中取) | 0.125 |
| F | 200 | 200(从E管中取) | 0.0625 |
| G | 200 | 0 | 0(空白) |
2、配置BCA工作液:
1)计算BCA工作液总量:
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例:BSA标准品样本个数为7个,未知样本个数2个,复孔数3个。
试管检测法:
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2ml/每个样本工作液体积=54ml
微孔检测法:
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200μl/每个样本工作液体积=5.4ml
2)根据计算出的BCA工作液需要总量,将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比,配制BCA工作液,充分混匀。
注意:
a. 由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1-2个孔。
b. 新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。
3、定量检测
①试管检测法(蛋白浓度检测范围:20-2000μg/ml)
1)按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)向每个试管中各加入2ml BCA工作液,充分混匀,37℃水浴中孵育30分钟 ,将各管冷却至室温,须在3-5分钟内完成检测。
3)用分光光度计在562 nm处,测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。
4)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
② 微孔检测法(蛋白浓度检测范围:20-2000μg/ml)
1)按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)每孔加入200μl BCA工作液,充分混匀,盖上96孔板盖,37℃孵育30分钟,冷却至室温,须在3-5分钟内完成检测。
3)用酶标仪在540-590 nm范围内,测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。
4)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:
a. BCA法测定蛋白浓度时,吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5分钟内完成,否则会影响蛋白定量的准确度。
b. 建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
c. 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
d. 未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
e. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
4、BCA蛋白定量分析结果举例:
微孔板检测法结果
| 蛋白浓度(μg/μl) | 原始吸光值 | 去除背景值后的吸光值 |
| 0 | 0.086(背景值) | 0.000 |
| 0.125 | 0.123 | 0.037 |
| 0.25 | 0.280 | 0.194 |
| 0.5 | 0.551 | 0.465 |
| 1 | 1.068 | 0.982 |
| 2 | 2.000 | 1.913 |
附表1. 干扰物质表
| 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | |
| 乙酸盐 | 0.2M |
| 甘氨酸 | 1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 50mM |
| MOPS | 50mM |
| Na+-柠檬酸 | <1mM |
| PIPES | 50mM |
| 磷酸钠 | 0.1M |
| 乙酸钠 | 0.2M pH 5.5 |
| TES | 50mM |
| Tris | 0.1M |
| 盐类 | |
| 硫酸铵 | 干扰 |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 3M |
| 极性化合物 | |
| DMSO | 5% |
| 甘油 | 10% |
| 去垢剂和变性剂 | |
| Brij35 | 1% |
| CHAPS | 1% |
| 盐酸胍 | 4M |
| NP-40 | 1% |
| 辛葡糖 | 1% |
| SDS | 1% |
| Triton X-100 | 1% |
| 糖类 | |
| 葡萄糖 | 10mM |
| 蔗糖 | 1M |
| 螯合剂 | |
| EDTA | 10mM |
| 还原剂 | |
| β-巯基乙醇 | 50μM |
| DTT | 1mM |
| 其他 | |
| 脂类 | 干扰 |
| HCl/NaOH | 0.1M |
储存条件:2~8℃
我公司销售的BCA蛋白定量试剂盒报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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