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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
162
- 英文名:
Micro BCA Protein Assay Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
冷藏
- 规格:
1600次微孔板(50管次)
特别提示:包括微量BCA蛋白定量试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:微量BCA蛋白定量试剂盒
英文名称:Micro BCA Protein Assay Kit
产品货号:WE0273
产品规格:1600次微孔板(50管次)
BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicinchoninic Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、 稳定、 灵敏的浓度测定。 其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒专为低蛋白浓度样品的蛋白定量而设计,可精确测定浓度为2.5-200μg/ml的蛋白溶液,试剂盒的灵敏性高,平行性好,不同种蛋白之间的测量差异极低。本试剂同多种非离子型去污剂有较好的相容性。
试剂盒组成:
| 组成 | 规格 |
| Micro BCA Reagent A(MA) | 120ml |
| Micro BCA Reagent B(MB) | 120ml |
| Micro BCA Reagent C(MC) | 6ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
保存条件:BSA Standard Solution:2~8℃,其它组分:室温
注意事项:BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
使用方法:
1、稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
| 管号 | 稀释液用量(μl) | 标准品用量(μl) | zuì终浓度(μg/ml) |
| A | 360 | 40 | 200 |
| B | 400 | 100(从A管中取) | 40 |
| C | 250 | 250(从B管中取) | 20 |
| D | 250 | 250(从C管中取) | 10 |
| E | 250 | 250(从D管中取) | 5 |
| F | 250 | 250(从E管中取) | 2.5 |
| G | 250 | 0 | 0(空白) |
2、配制Micro BCA测试工作液:根据标准品和样品的数量配制测试液。
试剂MD配制:4 volume MC + 100 volume MB
测试工作液WR配制: 1 volume MA + 1 volume MD
充分混匀后待用。
3、试管及微板检测(蛋白浓度检测范围:2.5-200μg/ml)
1)按上表准备好标准品及待测样品。
2)将蛋白样品和测试工作液WR按照1:1(体积比)比例充分混匀。在60℃孵育60分钟。建议:标准96孔微孔板测试以300μl/孔为zuì佳。
3)孵育完成后冷却到室温,在562 nm处读取吸光度值。
4)标准品与待测样品的吸光度值要扣除空白对照的吸光度值,然后进行浓度的计算。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
附表1. 干扰物质表
| 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | |
| 乙酸盐 | 0.2M |
| 甘氨酸 | 1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 50mM |
| MOPS | 50mM |
| Na+-柠檬酸 | <1mM |
| PIPES | 50mM |
| 磷酸钠 | 0.1M |
| 乙酸钠 | 0.2M pH 5.5 |
| TES | 50mM |
| Tris | 0.1M |
| 盐类 | |
| 硫酸铵 | 干扰 |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 3M |
| 极性化合物 | |
| DMSO | 5% |
| 甘油 | 10% |
| 去垢剂和变性剂 | |
| Brij35 | 1% |
| CHAPS | 1% |
| 盐酸胍 | 4M |
| NP-40 | 1% |
| 辛葡糖 | 1% |
| SDS | 1% |
| Triton X-100 | 1% |
| 糖类 | |
| 葡萄糖 | 10mM |
| 蔗糖 | 1M |
| 螯合剂 | |
| EDTA | 100mM |
| 还原剂 | |
| β-巯基乙醇 | 50μM |
| DTT | 1mM |
| 其他 | |
| 脂类 | 干扰 |
| HCl/NaOH | 0.1M |
储存条件:2~8℃
我公司销售的微量BCA蛋白定量试剂盒报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验法是十分常用的蛋白质比色定量方法,很多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的BCA蛋白定量试剂盒。BCA蛋白定量法相对于其它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优点。相对于蛋白质的固有的280nm吸收峰检测,BCA检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性,消除了核酸的干扰,核酸干扰在对细胞裂解物或其他生物样品进行蛋白定量时总是一个难以避免的干扰。在碱性条件下,蛋白将Cu2+ 还原为Cu+ ,Cu+ 与BCA 试剂形成紫色络合物,如图1,其吸光值与蛋白浓度成正比。测定在562nm 处的吸收值,并与标准
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功,或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存,需对细胞裂解液进行蛋白定量;为了判定蛋白的产量,需对纯化好的蛋白进行定量;为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记,同样需首先对蛋白样品进行定量,以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒,如BCA定量试剂盒等,操作起来,简便快捷。当然也有不少实验室,还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
目前常用比色法测定样品蛋白的含量:Bradford法(考马斯亮蓝法)、Lowry法(Folin-酚试剂法)、 BCA法等。但各有优缺点,大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。收集完蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大,大家可以根据具体情况选取。Bradford法(考马斯亮蓝法):考马斯亮蓝G
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