酵母质粒小提试剂盒报价

特别提示：包括酵母质粒小提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：酵母质粒小提试剂盒
英文名称：Yeast Plasmid mini Extraction Kit
产品货号：WH0039
产品规格：50次

本试剂盒对普通的碱裂解法进行了改进，可快速得到高纯质粒DNA，并祛除基因组DNA。通过离心吸附柱吸附、洗涤DNA，方便快速，不需使用有毒有害试剂，可同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。质粒得率与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关。

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液YP1	15ml
溶液YP2	15ml
溶液YP3	20ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液EB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	150μl
吸附柱CP2	50个
收集管（2ml)	50个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。溶液YP1加入RNase A后，应置于2-8℃，可稳定保存6个月。单独包装的RNase A可在室温保存12个月。

需要自备的试剂：Lyticase（目录号：WH0216)，山梨醇buffer。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液YP1使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前先检查平衡液BL、溶液YP2和YP3是否出现浑浊，如有混浊现象，可置于37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．溶液YP2和YP3使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g )。
5．提取的质粒量与酵母菌的培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6．实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
7．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取1-5ml酵母培养物（不超过5×10⁷酵母细胞），12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3．酵母细胞壁的破除：
  a、酶法：向菌体中加入300 μl山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase，充分混匀，并在摇床上220rpm，30℃处理1h。4000 rpm（~1500×g)离心10min，弃上清，收集沉淀。加入250 μl溶液YP1（请先检查是否已加入RNase A）重悬沉淀。
  注意：以上Lyticase的用量和处理时间为经验值，根据酵母菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
  b、玻璃珠法：向菌体中加入250 μl溶液YP1（请先检查是否已加入RNase A）重悬沉淀，彻底悬浮菌体。加入0.1g直径为0.45-0.55mm的酸洗玻璃珠，涡旋振荡10min。
4．向管中加入250 μl溶液YP2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分混匀，室温放置5-10min。
  注意：温柔混匀，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠。
5．向管中加入350 μl溶液YP3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm （~13400×g )离心20 min。
  注意：YP3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．小心地将上清液加入吸附柱CP2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CP2放入收集管中。
7．向吸附柱CP2中加入500μl缓冲液PD，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉废液。
8．向吸附柱CP2中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CP2放入收集管中。
9．重复操作步骤8。
10．将吸附柱CP2放入收集管中置于12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP2开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11．将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液EB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，再次离心。

补充说明：
1．通常酵母质粒拷贝数都很低，一般通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：
  可使用1-5 μl用作PCR模板。
  可使用5-10 μl用于转化大肠杆菌。
2．转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞，如我公司公司的目录号为WH0190和WH0189等产品。

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