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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
131
- 英文名:
Botulinus A/B Fluorescent PCR detection kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
】-20℃保存,避免反复冻融
- 规格:
48次/盒
特别提示:包括肉毒杆菌AB型双重荧光PCR检测试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:肉毒杆菌AB型双重荧光PCR检测试剂盒
英文名称:Botulinus A/B Fluorescent PCR detection kit
产品货号:SYA017
产品规格:48次/盒
本试剂盒适用于检测粪便、水、血液等样本肉毒杆菌(BL) A/B型DNA,用于肉毒杆菌(BL) A/B型感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【原理】
本试剂盒用一对肉毒杆菌(BL)A/B型特异性引物和一条特异性荧光探针,经过裂解提取DNA,后者在Taq DNA聚合酶作用下,配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分,通过PCR-荧光探针体外扩增法对肉毒杆菌(BL) A/B型DNA进行体外扩增,从而达到快速检测肉毒杆菌(BL) A/B型之目的。
【组成】
名称 数量 规格
核酸提取液 1管 2ml/管
Taq 酶系 1管 50μl/管
BL-A/B-qPCR MIX 1管 1000ml/管
BL-A/B -阳性质控品 1管 50μl/管
阴性质控品 1管 250μl/管
【储存条件】-20℃保存,避免反复冻融。
【试剂规格及有效期】48T/盒,有效期6个月。
【适用仪器】
双通道及以上PCR仪器。
【标本采集和保存与运输】
1. 人或动物:
采集新鲜粪便,取黏液脓血部位标本,密闭送检。
2.血液:
采集新鲜抗凝血(非肝素抗凝),密闭送检。
【使用方法】
1. DNA提取
1.1 粪便:挑取米粒大小粪便(尽可能取黏液脓血部分),于放置有0.5ml生理盐水的离心管中,振荡混匀,13000rpm离心2分钟。弃上清,沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
1.2 水标本:取水样3ml,13000rpm离心2min;弃上清,沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
1.3 血液标本:取2ml抗凝血,静置待自然分层,吸取上层(血浆层)及中层(Buffy coat层),13000rpm离心2分钟。弃上清,沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
2.PCR扩增
从试剂盒中取出BL-A/B-qPCR MIX、Taq酶系,室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 BL-A/B-qPCR MIX Taq酶系
用量 20μl 1μl
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μl,向每管中加入处理后样品或BL-阳性质控品和阴性质控品4μl,10000rpm瞬时离心10秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内,推荐循环条件:94℃→2分钟,后94℃ 30秒→55℃ 45秒,40个循环。
荧光通道选择:检测选择FAM通道和HEX/VIC/JOE通道。如果使用ABI系列仪器,请务必在passive reference和quencher处均选择“NONE”。
3. 结果分析判定
FAM通道:Ct值≤35肉毒杆菌A型为阳性;Ct 值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。重复试验之后,如果Ct 值仍然在37-40个循环之间,判断肉毒杆菌A型为阳性,没有荧光值增长肉毒杆菌A型为阴性。
HEX/VIC/JOE通道:Ct值≤35肉毒杆菌B型为阳性;Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。重复试验之后,如果Ct值仍然在37-40个循环之间,判断肉毒杆菌B型为阳性,没有荧光值增长肉毒杆菌B型为阴性。
【质控标准】
阴性质控品:FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
BL-阳性质控品:FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值均应小于30.0。
以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
【注意事项】
初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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