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药物筛选 基于iPS细胞的帕金
帕金森疾病(PD)是一种复杂的神经退行性疾病,全世界约有700至1000万人口受该疾病困扰。尽管其发病机制尚未有准确定论,但氧化应激反应被普遍认为是导致PD的关键因素。鱼藤酮(Rotenone)可诱发神经元损伤,其作为线粒体呼吸链中的复合体Ⅰ抑制剂在帕金森病的研究中应用广泛。
我们将野生型hiPSC来源的NPC接种于96孔板或384孔板中,然后进一步分化成为成熟的普通神经元,利用Rotenone处理而获得一种模拟PD的神经元损伤模型,筛选对神经元有保护作用的小分子化合物或中药提取物/单体,并初步确定其有效浓度。
利用Rotenone诱导的PD细胞模型
利用PD模型对不同药物组合进行有效性筛选
阿尔兹海默症药物筛选模型
阿尔兹海默症(AD)是一种中枢神经系统的退行性疾病,主要发生在老年人群,其典型特征为脑中出现淀粉样斑块病变和神经元纤维缠结。类淀粉胜肽假说认为β淀粉样蛋白(Aβ42)在大脑堆积可能是导致阿尔兹海默症的根本原因。
利用基因修饰方法,我们建立了基于hiPSCs与阿尔兹海默症致病基因的高效、快速的新型疾病细胞模型。在该细胞模型中Aβ42表达水平显著升高,我们将hiPSCs-NPCs接种至96孔板或284孔板并分化为神经元细胞后,即可高通量筛选Aβ抑制剂。
AD相关基因过表达模型
Aβ-42在混合神经元中的表达水平
UMC3: 野生型iPSC来源的混合神经元;UMC3-21: 过表达AD相关基因的混合神经元利用AD模型对不同药物组合进行有效性筛选
神经细胞毒性测试
细胞活性作为细胞暴露于有毒物质后存活或死亡的重要指标,有助于了解某些基因、蛋白质和相关通路的作用机制。在神经中枢药物开发过程中,神经细胞毒性检测多用于药物筛选中检测化学分子是否影响细胞增殖或者是否表现出杀伤。
CCK8 Assay是一种基于WST-8而广泛应用细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏检测方法。在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。因此CCK8可用于测试不同药物在不同条件下的毒性反应,亦可检测药物的IC50( 50% half maximal inhibitoryconcentration )。
CIB已高效地将多种健康人和疾病来源的hiPSC/ESC分化为NPC细胞产品。这些NPC细胞经过大批量增殖后性状依然稳定,在转移到到96孔板或384孔板后,使用CIB特有的培养体系,可以诱导为高纯度成熟神经元,进行高通量神经毒性药物测试。
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