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文献和实验5 min 结果:可见Bioteke 2×power Taq PCR MasterMix试剂对于原核或真核生物DNA均可高效。相较于同类的taq mix的扩增效率更高,且对于高GC含量也可得到很好的扩增。取扩增产物10 μL用1%琼脂糖凝胶电泳如图可见明亮条带。 三、 cDNA扩增 人类胎盘提取的总RNA反转录的cDNA扩增1.2 kbp片段 模板:人类胎盘提取的总RNA反转录的cDNA 200 ng/50 μL Primer: PrimerF
1 0.1-0.5µM Primer 2 0.1-0.5µM 10X Reaction buffer 1X Magnesium 1.0-3.0mM dNTP mix 200 mM each dNTP Thermostable DNA polymerase 1-4 units/100 ml reactionRT-PCR基础 RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起,提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
NaOH 中浸泡 10 分钟,用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。 当然,这些也不是绝对的要求。如果是操作熟练。完全可以用初次开封的离心管和枪头,新过滤的超纯水,进行 RNA 的提取。 2. Mix 配制 一般来讲,进行 real-time qPCR MasterMix 都是 2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于 real-time qPCR 灵敏度高,所以每个样品至少要做3 个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于 Ct 相差较多或者 SD 太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应
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