1.5 mL无色透明离心管

小鼠胸腺单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠胸腺单细胞悬液制备流程 1.用颈椎脱臼法处死小鼠，75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠置于无菌操作台上，腹部朝上。 小鼠胸骨下方剪开小鼠的胸腔，可看到白色透明胸腺，呈两叶分布，位于两肺的前方，胸骨的正后方。 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。 将胸腺置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显块状物。 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞，并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意

TaKaRa RNAiso Reagent

。 ③ 从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三层,即：无色的上清液、中间的白色蛋白层及带有颜色的下层有机相。吸取上清液转移至另一新的离心管中（切忌吸出白色中间层)。 ④ 向上清中加入等体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，在15～30℃下静置10分钟。 ⑤ 12,000 g 4℃离心10分钟。一般在离心后，试管底部会出现沉淀。 4.RNA沉淀的清洗。 小心弃去上清，缓慢地沿离心管壁加入75％的乙醇l ml(切勿触及沉淀)，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，12,000 g 4℃离心5分钟

人外周血PBMC的制备及注意事项

人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移