广谱蛋白酶抑制剂混合物(含EDTA，100X)

特别提示：包括广谱蛋白酶抑制剂混合物(含EDTA，100X)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：广谱蛋白酶抑制剂混合物(含EDTA，100X)
英文名称：Broad-spectrum protease inhibitor mixture (containing EDTA, 100X)
产品货号：ZN2920
产品规格：1ml

细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本产品可以有效抑制常规细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等。

应用领域：
本产品适用于原代细胞，培养的哺乳动物细胞，动物组织，植物组织，酵母或细菌细胞等裂解物制备过程中蛋白的保护。

使用方法：
本蛋白酶抑制剂混合物为 100X 的储存液，使用时按照 1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml 裂解液中加入 10μl 蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，0.1M 的 EDTA也按照 1:100 的比例加入到裂解液中。待所需的抑制剂添加完毕并混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。

注意事项：
1.传统的蛋白酶抑制剂(E-64, AEBSF, bestatin, leupeptin and aprotinin)是不能够抑制某些去泛素化(DUB)蛋白酶(例如 ATAXIN-3)的功能的。
2.本产品以 DMSO 为溶剂，操作时注意防护。
3.本产品使用前室温平衡至溶解。
4.本产品使用前需震荡，以保证各成分均匀。
5.本产品可以适当分装后保存，并应在临使用前添加到裂解液等适当溶液中。
6.如用于检测金属蛋白酶活性，2D 电泳以及 IMAC,则不宜添加 EDTA。

保存：-20℃保存，12个月有效

除了广谱蛋白酶抑制剂混合物(含EDTA，100X),，我公司还供应以下相关产品：



名称：动物线粒体总蛋白提取试剂盒
货号：BTN130891
规格：50次

名称：His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂
货号：BTN130530
规格：10mL
His-Ni亲和层析是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，纯化过程中，为防止各种蛋白酶降解重组蛋白，需要加入足够、特异的蛋白酶抑制剂。本产品即为优化的His标签蛋白蛋白酶抑制剂混合液。专门用于纯化His标签蛋白时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止重组表达蛋白质降解。本品抑制谱广，能特异性抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶、嗜热菌蛋白酶样蛋白酶和氨基肽酶等各种蛋白酶活性。本产品为DMSO溶液。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

名称：ASPP1蛋白检测试剂盒
货号：KFS226
规格：50T
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液LysisBuffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究（本试剂盒包含兔抗ASPP1抗体），但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。

名称：RIPA裂解液(中)
货号：SY0316
规格：100ml
本品属于裂解强度居中的RIPA裂解液，含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

注意事项
1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 细胞样品

1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：

1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。