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463
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AAT-promoter-luc Reporter gene plasmid
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
- 规格:
1μg
特别提示:包括AAT启动子荧光素酶报告基因质粒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:AAT启动子荧光素酶报告基因质粒
英文名称:AAT-promoter-luc Reporter gene plasmid
产品货号:YT456
产品规格:1μg
AAT启动子报告基因质粒是用于检测AAT promoter转录活性水平的报告基因质粒。AAT启动子质粒是以pGL6质粒为模板,在其多克隆位点插入了human AAT的启动子序列,可以高灵敏度地检测AAT promoter的激活水平。
AAT(alpha 1-Antitrypsin或alpha-1 antiproteinase,也简称为A1AT),又称serine peptidaseinhibitor,clade A,member 1或serine proteinase inhibitor,clade A,member 1(简称SERPINA1),是一种可以被分泌到细胞外的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可以抑制elastase、plasmin、thrombin、trypsin和chymotrypsin等。AAT基因缺陷时会导致肺气肿(emphysema)或肝脏疾病等。
pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到zuì低。
AAT启动子质粒的主要信息如下:
| Base pairs | 6445 |
| AAT promoter | 20-900 |
| luc2 reporter gene | 946-2598 |
| SV40 late poly(A) signal | 2633-2854 |
| SV40 early enhancer/promoter | 2902-3320 |
| Synthetic neomycin phosphotransferase | |
| (Neor) coding region | 3345-4139 |
| Synthetic poly(A) signal | 4164-4212 |
| Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region | 4279-4298 |
| ColE1-derived plasmid replication origin | 4536 |
| Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 5327-6187 |
| Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 6292-6445 |
| Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region | 6394-6413 |
AAT启动子质粒的图谱如下:
使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. AAT启动子可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT273)。
3. 可以激活AAT promoter的试剂,可以用作AAT启动子报告基因检测时的阳性对照。
储存条件:-20℃。
我公司销售的AAT启动子荧光素酶报告基因质粒优惠促销,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验【求助】关于构建目的基因启动子序列的虫荧光素酶报告基因重组质粒的问题请教
longgyin8341 最近想做虫荧光素酶报告基因,但是从来没有做过,想求院子里高手指教: 我是要观察一种药物是否能作用于细胞内的几种核受体(NFkB,PPAR,ER(目前还不清楚究竟是哪个,需要分别试验))的启动子区域,影响这几个核受体的转录水平,从而影响细胞的一些功能(比如凋亡等)。计划将这三种核受体的启动子区域分别扩增出来,然后与虫荧光素酶(或其他报告基因)构建重组质粒。再分别转染细胞,加入药物处理,观察荧光素酶的活性,以探索药物是否
表达后修饰,直接具有完全酶活。发光机制生物荧光实质是一种化学荧光。萤火虫荧光素酶在Mg2+、ATP、O2的参与下,催化D2荧光素(D2luciferin) 氧化脱羧,产生激活态的氧化荧光素,并放出光子,产生550~580 nm 的荧光,其化学反应式如下。这种无需激发光就可发出偏红色的生物荧光,其组织穿透能力明显强于绿色荧光蛋白(GFP)。荧光素酶是靠酶和底物的相互反应发光,特异性很强,灵敏度高,由于没有激发光的非特异性干扰,信噪比也比较高。二、荧光素酶报告基因的检测流程1、重组质粒制备: 制备含有
生物发光(bioluminescence)是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。生物发光成像是一种研究技术,它使用来自自然物种的荧光素酶或这些酶的改良荧光素酶来跟踪细胞或动物内部的生物过程。荧光素酶通常编码在报告基因中,该报告基因被引入到感兴趣的细胞或动物中。感光相机(CCD)检测到的光子数代表了所选生物过程的变化。 实验原理: 利用转基因技术,将荧光素酶基因连接于启动子下游,稳定整合到质粒内,再通过原核显微注射的方法,使其整合到小鼠受精卵基因组中下,并稳定遗传给后代。使荧光素酶
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