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文献和实验on ice for 30 min (all antibodies 1/100 v/v). 4. Wash with 10 mL of PBS/FBS, spin and resuspend in PBS/FBS with 1 µg/mL of propidium iodide. Filter through 70 µm nylon mesh. 5. Select cells which are PI negative, c-kit positive, Sca-1 positive
; 检测JC-1聚合物时,可以把激发光设置为525nm,发射光设置为590nm。 注意:此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发波长和最大发射波长。如使用荧光显微镜观察,检测JC-1单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置,如观察GFP或FITC时的设置。检测JC-1聚合物可参考观察其它红色荧光,如碘化丙啶的设置。 出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降,并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。 B、流式细胞仪分析 用流式细胞仪检测(Ex
细胞转化。 随后用无血清培养基洗去PMA,再静置24小时获得M0巨噬细胞。进一步极化:M1型用LPS(100 ng/mL)+ IFN-γ(20 ng/mL);M2型用IL-4(20 ng/mL)+ IL-13(20 ng/mL),均作用24小时。该体系操作简便、重复性好,适用于高通量筛选与机制研究。 五、总结 巨噬细胞的分化与极化在多种疾病(如肿瘤、自身免疫病、慢性炎症和感染)的发病机制及治疗中扮演关键角色。随着对其功能异质性与调控网络的深入解析,巨噬细胞正成为免疫治疗领域的重要靶点。菲恩生物聚焦巨噬
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