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文献和实验on ice for 30 min (all antibodies 1/100 v/v). 4. Wash with 10 mL of PBS/FBS, spin and resuspend in PBS/FBS with 1 µg/mL of propidium iodide. Filter through 70 µm nylon mesh. 5. Select cells which are PI negative, c-kit positive, Sca-1 positive
; 检测JC-1聚合物时,可以把激发光设置为525nm,发射光设置为590nm。 注意:此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发波长和最大发射波长。如使用荧光显微镜观察,检测JC-1单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置,如观察GFP或FITC时的设置。检测JC-1聚合物可参考观察其它红色荧光,如碘化丙啶的设置。 出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降,并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。 B、流式细胞仪分析 用流式细胞仪检测(Ex
感受器组成,只要调整好鞘液压力和标本管压力,鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向,能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等,从而使激光激发的荧光信息准确无误。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种,供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。三、主要构造和工作原理:激光光源及光束形成系统流式细胞仪可配备一根或多根激光管,常用的激光管是氩离子气体激光管,它的发射光波长488ηm,此外可配备氦氖离子气体激光管(波长633ηm)和/或紫外激光管。流式细胞仪的主要
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