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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
488
- 英文名:
Luciferase Reporter Gene Assay Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
未拆封试剂盒-20℃避光
- 规格:
100T|500T|1000T
特别提示:包括萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
英文名称:Luciferase Reporter Gene Assay Kit
产品货号:SY0058
产品规格:100T|500T|1000T
报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。本萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit),是通过萤火虫荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在 Mg2+和 O2 参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中,发出生物荧光(bioluminomescence),然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。
产品特点
1)简便,快捷。
2)灵敏度高,可检测10-20 mol的荧光素酶。
3)安全,非放射性。
4)酶的浓度线性范围可达8个数量级。
产品组份:
| 组分 | 100T | 500T | 1000T |
| 细胞裂解液 | 60ml | 60ml×5 | 60ml×10 |
| 萤火虫荧光素酶检测试剂 | 10ml | 10ml×5 | 10ml×10 |
保存:未拆封试剂盒-20℃避光保存,有效期为 6 个月。-70℃避光保存,有效期为一年。试剂盒内萤火虫荧光素酶检测试剂(Firefly luciferase assay reagent)避光保存,不能反复冻融。
实验步骤
1. 细胞裂解:
1)将转入报告基因的细胞中的培养基移除,加PBS轻轻洗涤。按如下方案加入细胞裂解液(Cell lysis buffer),然后将培养板放在微型振荡器上室温振荡15min,充分裂解细胞。
| 细胞培养板 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
| 细胞裂解液(µl/孔) | 30µl | 60µl | 120µl | 250µl | 500µl |
【注】:裂解产物可室温保存6h,4℃保存16h,-70℃可长期存放。(裂解产物不能多次反复冻融)。
2)将充分裂解后的裂解产物,10000-15000rpm离心3-5min。离心后将上清液移入新的EP管中进行后续检测。
2.荧光素酶检测:
1)按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开,设定参数,测定时间为10s,测定间隔为2s。
2)将样品按照20~100µl的体积(如果样品量足够,请加入100µl)加入测量管中(保持每次样品的加样量一致),另外加入萤火虫荧光素酶检测试剂(Firefly luciferase assay reagent)混匀 2-3 次(不能漩涡混匀),充分混匀后测定RLU(Relative light unit),同时设置细胞裂解液(Cell lysis buffer)为对照孔。
注意事项
1)温度会对酶的活性会产生影响,因此所有试剂应放置室温后再使用。
2)如用单管荧光测定仪测定,每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。
3)萤火虫荧光素酶催化的生物发光的zuì强发光波长为 560nm。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验好像现在比较常用的是双报告基因检测吧,可以解决你说的问题 huxueliang 利用双荧光素酶报告基因系统 同时转入内参质粒 天飒 huxueliang 麻烦你讲讲利用双荧光素酶报告基因系统 ,同时转入内参质粒吧,我是一名新手这方面知道的少,谢谢啦! 叮当儿 promega公司的双荧光素酶标记系统,好多人都在用,同时转入要检测的报道基因及Renillia,操作的话说明
光素酶在生物体内得到持续表达,注射底物后与表达的荧光素酶反应发光。(自发光,其信号的发射不需要外部光源激发)。目前,比较常用的是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。 优势: 低背景,避免了小鼠自发荧光的干扰和减少了外界激发光源的干扰 高灵敏度,皮下少量的发光标记肿瘤细胞也可被检测到。如,AniView 100 在实际应用中,可检测到皮下至少 100 个发光标记的肿瘤细胞,但检测到的最少细胞数量与单个细胞的发光强度有关。 不足之处: 标记手段单一,只能通过转基因形式标记细胞、基因 标记物单一,目前主要
表达后修饰,直接具有完全酶活。发光机制生物荧光实质是一种化学荧光。萤火虫荧光素酶在Mg2+、ATP、O2的参与下,催化D2荧光素(D2luciferin) 氧化脱羧,产生激活态的氧化荧光素,并放出光子,产生550~580 nm 的荧光,其化学反应式如下。这种无需激发光就可发出偏红色的生物荧光,其组织穿透能力明显强于绿色荧光蛋白(GFP)。荧光素酶是靠酶和底物的相互反应发光,特异性很强,灵敏度高,由于没有激发光的非特异性干扰,信噪比也比较高。二、荧光素酶报告基因的检测流程1、重组质粒制备: 制备含有
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