2 x Taq PCR Master Mix

产品描述

2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反应预混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反应缓冲液、loading Dye 等成分，使用时只需取适量本产品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 补足体积，使反应体系浓度为 1× 即可进行 PCR 反应。本产品最长可扩增 5kb DNA片段，具有良好的扩增特异性和模板兼容性， PCR 产物 3' 端带突出 A 碱基，纯化后可直接用于 T/A 克隆。

本产品中包含两种染料，PCR反应完成后无需额外添加 loading buffer，可以直接进行电泳，且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率，但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验，建议在分析前对 PCR 产物进行纯化，或使用无染料的PCR预混液。

订购信息

产品名称	货号	规格
2 x Taq PCR Master Mix	AN11L818	2*1mL
2 x Taq PCR Master Mix	AN11L819	5*1mL

运输与保存

蓝冰运输。-20℃保存，有效期24个月。

使用方法

1.    常规 PCR 反应体系

组分	20 μL体系	50 μL体系	终浓度
2 x Taq PCR Master Mix	10 μL	25 μL	1 x
正向引物（10 μM）（1）	0.4-0.8 μL	1-2 μL	0.2-0.4 μM
反向引物（10 μM）（1）	0.4-0.8 μL	1-4 μL	0.2-0.4 μM
DNA 模板（2）	X μL	X μL	-
ddH2O	To 20 μL	To 50 μL	-

(1)  引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进行调整； 

(2)  不同模板最佳反应浓度有所不同，以 50 μL 体系为例：模板为基因组 DNA 时，一般推荐的使用量为 10~400 ng；当模板为质粒或病毒 DNA 时，一般推荐的使用量为 10 pg~20 ng。

2.    常规 PCR 反应程序

步骤	温度	时间
预变性（1）	94℃	3~5 min
变性	94℃	15 sec
退火	53~65℃	15 sec
延伸（2）	72℃	30~60 sec/kb
	30~35 Cycles
终延伸	72℃	5min

(1)  该预变性条件适合绝大多数扩增反应， 对于一些复杂模板， 例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的PCR 扩增，预变性时间可适当延长至 10 min，以提高预变性效果；

(2)  关于延伸速率，当目的片段长度不超过 2 kb 时，推荐使用 30 sec/ kb；当目的片段长度大于 2 kb 时，推荐使用 60 sec/kb。延伸速率与模板复杂程度有关，如遇产率较低可适当提高延伸时间。

注：如果使用酵母菌液作为PCR 扩增模板，建议目的片段长度不超过2.5kb， 若超出2.5kb, 建议将酵母菌液预先进行破壁处理。

3.    凝胶浓度对应的染料迁移距离

琼脂糖凝胶浓度	金色条带	蓝色条带
0.8%	~80 bp	4000 bp
1.0%	~40 bp	2000 bp
1.5%	~20 bp	1500 bp
2.0%	<10 bp	1200 bp
2.5%	<10 bp	1200 bp
3.0%	<10 bp	1200 bp

注：染料会影响吸光度。

注意事项

1.     本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.     本产品在短期 -20℃ 储存时不会凝固，可以随取随用，如遇储存温度波动，体系结冰为正常现象不影响使用。

3.     建议将所有的反应组分在冰上配制，最后加入2 x Taq PCR Master Mix。

4.     使用基因组模板进行较长片段扩增需要使用高质量纯化的DNA模板，可以提高 PCR 成功率。

5.     本产品扩增产物可用于 T/A 克隆。由于本产品含有 Loading Dye，PCR 产物需经过切胶回收后才可充分去除 Loading Dye。

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本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。