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- 2025年07月11日
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文献和实验。这13个载体中有9个的多克隆位点是扩展过的，有6个限制性酶切位点。扩展后的多克隆位点方便我们从λ噬菌体载体构建的文库中将所需的基因克隆出来并定向插入到表达载体中。所有载体上都带有可以将GST切割下来的蛋白酶识别位点，不同载体携带的蛋白酶不同，可以分成T系列、X系列和P系列，分别代表采用凝血酶Thrombin、Xa因子蛋白酶以及GE医疗产的PreScission™蛋白酶作为蛋白酶切割位点。前面两个都是非常经典的融合表达载体的蛋白酶切割位点，但是由于这两种蛋白酶切割需时较长而且要求在室温条件下切割GST
Protease 是一种由人鼻病毒 14 型的 3C 蛋白酶和 GST 组成的融合蛋白。它可以特异性的将 pGEX-6P 系列等载体表达出的带有酶底物识别氨基酸序列融合蛋白的 GST 标签进行分离。由于其自身带有 GST 标签，Prescission Protease 能在单一步骤实现 GST 标签的柱上酶切和蛋白质纯化。此蛋白酶在低温条件下具有最佳活性，因此低温孵育不仅可以保证 GST 标签的高效去除，也能维持目标蛋白的活性。 Thrombin 和 Factor Xa 常温下具有较高的酶活，当选
, RocheBenzamidine-AgaroseEnterokinase Asp-Asp-Asp-Asp-Lys�New England Biolabs, Novagen, RocheTrypsin Inhibitor-AgaroseTEV protease Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln�GlyInvitrogen – Life Technologies Ni-NTA (6His recomb. TEV)PreScission Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln�Gly-ProAmersham
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