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- 2026年05月28日
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文献和实验Expi Supernatant 进行培养。 纯化过程中，选择柱体积为 0.2 ml 的三种纯化柱：Ni Sepharose 6 FastFlow, Ni Sepharose Excel, 和 Strep-Tactin®XT 4Flow®。 分别用其纯化 60CV (column volume, 柱体积) 和 120CV 的样品，并保持上样样品中的蛋白质含量在纯化柱最大结合载量 80%-95 %。 二、实验结果 01 对比蛋白质回收效率 对于不同的填料，可以从洗脱组分中回
Sepharose excel 填料能够耐受高达 100 mM EDTA 和 10 mM DTT，特别适合使用在有添加剂和还原剂存在的样品以及真核细胞表达的分泌蛋白。此款类型填料无需去除 EDTA 即可使用含有培养基的蛋白组分进行柱层析实验，极大地简化实验流程，保护蛋白活性。同时，Ni Sepharose excel 填料支持不脱 Ni 的情况下直接进行 NaOH 清洗，防止交叉污染。 GST 标签蛋白填料简介 GST 标签蛋白填料的选择 1 Glutathione Sepharose 4B 填料
要去除内毒素可延长至12小时），再用5-10个体积去离子水冲洗。 3. 去除强离子吸附蛋白：使用1.5M NaCl洗柱子，约10-15分钟，然后用大约10个体积去离子水冲洗。 4. 挂镍：加入0.5ml（1ml柱子）或者2.5ml（5ml柱子）0.1M的NiSO4，使用5个柱体积的去离子水冲洗，再用缓冲液冲洗5个柱体积，最后置换到20%乙醇中保存。 Ni excel系列 可以定期使用NaOH进行彻底的在位清洗。使用NaOH能够比较彻底地清除各类蛋白的杂质，便于延长柱子的使用寿命。使用不同
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