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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
359
- 英文名:
Bradford Protein Assay Kit
- 保质期:
一周
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
密封
- 规格:
250T
特别提示:包括Bradford法蛋白浓度测定试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Bradford法蛋白浓度测定试剂盒
英文名称:Bradford Protein Assay Kit
产品货号:QN1072
产品规格:250T
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的zuì大吸收峰的位置(Imax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。
操作说明:
一.微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品,取10ul,稀释至250ul ,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml 5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释(zuì好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二.分光光度计法 如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。步骤如下:
1. 取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。
2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。
3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml的5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
储存条件:密封保存,有效期九个月。
我公司销售的Bradford法蛋白浓度测定试剂盒报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验原理:这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液: ①Bradford储存液 100ml95%乙醇 200ml88%磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
(一)实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色
发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
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