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- 百奥莱博
- MT0111-IXJ
- 北京
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
185
- 英文名：
Uracil-DNA Glycosylase;Uracil N-Glycosylase
- 保质期：
2年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1000U|5000U
特别提示：包括尿嘧啶DNA糖基酶(UDG/UNG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：尿嘧啶DNA糖基酶(UDG/UNG)
英文名称：Uracil-DNA Glycosylase;Uracil N-Glycosylase
产品货号：MT0111
产品规格：1000U|5000U
本制品为来源于E. coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白，分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，但对RNA无活性。 UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染，作用原理基为：如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键，降解该PCR扩增产物。
产品应用：
· 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
· 去除PCR残存污染
产品组成：
| 组分 | 1000U | 5000U |
| Uracil N-Glycosylase(5U/μl) | 200μl | 1ml |
储存条件：-20℃，可保存2年，避免反复冻融。
活性测试：
取1μg dUTP PCR产物，用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1：对照（不加UNG酶）；
泳道2-7：分别为 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37℃消化30min后的PCR产物；
M：DNA Marker 2000（MT0038）
性能测试：
UNG在标准PCR体系下（50μl体系）性能测试。 处理方法为：在反应体系中分别加入不同量的UNG（如图所示），50度2min，95度5min，然后进入PCR循环扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。泳道1-3：标准dNTP Mixture，UNG用量0.25U/0.5U/1U；
泳道4-6：dNTP/dUTP Mixture，UNG用量0.25U/0.5U/1U；
M：DNA Marker 10000（MT0039）
单位定义：在标准PCR反应体系下，37℃条件下，1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。
反应Buffer：Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。
贮存液：20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM DTT, 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
热失活：95℃，5min。
使用举例：
1．配制反应体系：
| 加入物 | 加入量 |
| Strong Taq DNA Polymerase | 0.5μl |
| dNTP/dUTP Mixture | 2~4μl |
| 10×Hi PCR Buffer | 5μl |
| Uracil N-Glycosylase(5U/μl) | 0.2~0.5μl |
| Primers (10μM each) | 1μl |
| Template DNA | 10ng-1μg |
| DEPC-treated Water | 至50μl |
2．PCR循环参数设置
| 循环数/过程 | 温度 | 时间 |
| 去污染 | 50℃ | 2min |
| 热失活 | 95℃ | 5min |
| 30～40 | 95℃ | 20s |
| 50～60℃ | 20s | |
| 72℃ | 1kb/min | |
| Last Cycle | 72℃ | 5min |
辅助试剂：
Strong Taq DNA Polymerase(货号：MT0022)
dNTP/dUTP Mixture(货号：MT0112)
我公司销售的尿嘧啶DNA糖基酶(UDG/UNG)优惠促销，UNG酶，UDG酶质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验）法 由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。 1、原理：在PCR产物或引物中用dU 代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育，因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键，可除去dU而阻止TaqDNA聚合酶的延伸，从而失去被再扩增的能力。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶，而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用
化的PCR 产物与UNG 一起孵育，因UDG 可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键，可除去dU 而阻止TaqDNA 聚合酶的延伸，从而失去被再扩增的能力。UNG 对不含dU 的模板无任何影响。UNG 可从单或双链DNA 中消除尿嘧啶，而对RNA 中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。 2）dUTP 法：用dUTP 代替dTTP，使产物中掺入大量dU.在再次进行PCR 扩增前，用UNG 处理PCR 混合液即可消除PCR 产物的残留污染。由于UNG 在PCR 循环中的变性一步便可被灭活
使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR，g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。 3. 尿嘧啶糖苷酶（UNG）法 由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。 （1）原理：在PCR产物或引物中用dU代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育，因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键，可除去dU而阻止TaqDNA聚合酶的延伸，从而失去被再扩增的能力
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