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鬼笔环肽是从毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中得到的有毒环状七肽,它的作用与细胞松弛素B恰好相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。鬼笔环肽通过与聚合的微丝结合, 抑制了微丝的解体, 破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。用FITC和Rhodamin等荧光物质标记的鬼笔环肽可特异的与真核细胞的F-actin结合,从而显示微丝骨架在细胞中的分布。
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文献和实验相关实验
从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱,它同细胞松弛素的作用相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。它同聚合的微丝结合后, 抑制了微丝的解体, 因而破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。
1. 培养细胞到对数生长期(约 107 细胞 /ml )。 2. 直接取 0.1ml 甲醛加到含有 1ml 培养物的离心管中固定细胞(甲醛浓度为 3.7 %;标准母液是 37 %)。 3. 在甲醛中培养细胞 30 分钟或稍长时间。 4. 用 PBS 洗两次,离心 5 分钟收集细胞。 5. 用 50 μ l 的 PBS 悬浮细胞,加 5 个单位的罗丹明或荧光素连接的鬼笔环肽。 6. 用 PBS 洗 3 次,重新悬浮在小体
的鬼笔环肽。 6. 用 PBS 洗 3 次,重新悬浮在小体积的封固剂中。 7. 用罗丹明或荧光素滤片观察。
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