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- 李记生物Life-iLab
- AP12L015
- 上海
- 2025年12月31日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
量大从优，欢迎询价
- 英文名：
/
- CAS号：
/
- 保质期：
12个月
- 供应商：
李记生物
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
500T
Bradford蛋白定量试剂盒
产品描述
Bradford 法蛋白定量是基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。
订购信息
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Bradford蛋白定量试剂盒 |
AP12L015 |
500 T |
产品组分
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组分 |
规格 |
保存温度 |
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A. Bradford试剂 A |
125mL |
4℃ |
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B. 蛋白标准（5mg/ml BSA） |
1 mL |
-20℃ |
运输与保存
蓝冰运输。组分A在4℃保存，组分B在-20℃保存，有效期12个月。
使用方法
方案一、试管检测
1.试剂准备
(1) 取适量5mg/mL蛋白标准，PBS稀释至终浓度为2mg/mL蛋白标准。配制后可立即使用，也可以 -20℃ 长期保存。
(2) 稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
表1：BSA标准品配制表
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标准品编号 |
稀释液体积μL |
2mg/mL标准品用量μL |
标准品终浓度μg/mL |
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1 |
0 |
100 |
2000 |
|
2 |
50 |
150 |
1500 |
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3 |
200 |
200 |
1000 |
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4 |
200 |
200(从3号管中取) |
500 |
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5 |
200 |
200(从4号管中取) |
250 |
|
6 |
200 |
200(从5号管中取) |
125 |
|
7 |
200 |
0 |
0 |
(3) 取干净的试管，将30μL稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
(4) 取干净的试管，分别加入30μL待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个样品做2-3 个平行反应。
2.样品孵育及检测
(1) 向上一步骤配制的不同浓度的标准品BSA和待测样品试管中各加入1.5 mL Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，室温放置10 min。
(2) 用分光光度计测定595 nm 处的吸光值。
3.制作标准曲线和计算样品浓度
(1) 利用Excel或其他软件绘制标准曲线，并计算样品中的蛋白浓度。
(2) 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
方案二 微孔检测
1.试剂准备
1.1 取适量5mg/mL蛋白标准，PBS稀释至终浓度为2mg/ml蛋白标准。配制后就能使用，也可-20°C长期保存。
1.2 将按表2稀释好的BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各5μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个样品做2-3 个平行反应。
表2：BSA标准品配制表
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标准品编号 |
稀释液体积μL |
2mg/mL标准品用量μL |
标准品终浓度μg/mL |
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1 |
0 |
20 |
2000 |
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2 |
10 |
30 |
1500 |
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|
3 |
40 |
40 |
1000 |
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4 |
40 |
40(从3号管中取) |
500 |
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5 |
40 |
40(从4号管中取) |
250 |
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6 |
40 |
40(从5号管中取) |
125 |
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7 |
40 |
0 |
0 |
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2.样品孵育及检测
(1) 每孔加入250μL Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10 min。
(2) 用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
3.制作标准曲线和计算样品浓度
(1) 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
(2) 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 样品中若含有去垢剂会影响检测结果，请试用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒。
3. 要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线。
4. 需准备 37℃ 水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 465-595nm 之间，595nm最佳。酶标仪需与 96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。
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文献和实验Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ）
Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250
Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ）
Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250
原理：这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465－595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液： ①Bradford储存液 100ml95％乙醇 200ml88％磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
