免疫悬浮类白血病，淋巴细胞培养统计及问题沟通

细胞状态好坏直接影响后期实验结果，长期统计培养中遇到的问题习惯养成，对用户及公司双方所需都有好趋势并积极意义。
国内库可用免疫类暂列上海库协和库：
-----------------淋巴细胞类
小鼠T淋巴细胞瘤细胞；Cyc-Tag(S49)    人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS   人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS(RA.1)  人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1    急性T淋巴细胞白血病细胞；TALL-104    人T淋巴细胞白血病细胞；HuT 78   小鼠淋巴细胞白血病；L1210    小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH2    小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH3    小鼠T淋巴细胞；Cl.Ly1+2-/9   人急性T淋巴细胞性白血病细胞；I 2.1(CRL-2572)    人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat   人急性T淋巴细胞白血病细胞；JurkatE6-1   人B淋巴细胞母细胞；NTCC721.221   小鼠T淋巴细胞；CTLL-2 [CTLL2]   小鼠B淋巴细胞；WEHI 231    EB病毒转化的绒猴淋巴细胞；B95-8     中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤；MR1 [derivative of HB-11048]    人T淋巴细胞白血病细胞；6T-CEM    人T淋巴细胞白血病细胞；HuT 78    人T淋巴细胞白血病细胞；A3    人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞；CCRF-CEM [CCRF CEM]   人急性非B非T淋巴细胞性白血病细胞；Reh   人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞；CCRF-CEM [CCRF CEM]    人急性淋巴细胞白血病细胞；CEM/C1   人淋巴细胞；1301
----------------- 白血病类
人急性早幼粒白血病细胞；HL-60   人慢性髓系白血病细胞；K562   小鼠红白血病细胞；MEL   人急性单核细胞白血病细胞；THP-1    人巨细胞白血病细胞株；Mo7e    人红系白血病细胞；TF-1    人类原巨核细胞型白血病细胞；UT-7   小鼠单核巨噬细胞白血病细胞；RAW 264.7 [RAW264.7
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-1   615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7712   615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7912   615小鼠网织细胞性白血病瘤株；L615   人浆细胞白血病细胞；NCI-H929    人成巨核细胞白血病细胞；MEG-01   人外周血嗜碱性白血病细胞；KU812   人T淋巴细胞白血病细胞；6T-CEM   人巨核细胞白血病细胞；Dami   人红白细胞白血病细胞；HEL   人成巨核细胞白血病细胞；MEG-01   人T淋巴细胞白血病细胞；A3   急性髓系细胞白血病细胞；KG-1   人Ph+急淋白血病细胞系；SUP-B15   人红白血病细胞；Kasumi-1    人T淋巴细胞白血病细胞；HuT 78    人急性单核细胞白血病单核细胞；AML-193   人急性淋巴细胞白血病细胞；CEM/C1    人急性淋巴母细胞性白血病细胞；MOLT-4    小鼠网织细胞性白血病细胞；L615
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-2H3
公司来源细胞暂不在后期讨论范围内，国产血清暂不在讨论范围，培养中遇到的问题，请详细描述处理细胞手法，细节，厂家，货号。冻存步骤，复苏步骤，细胞问题描述。
常见问题建议：专用培养基1640，胰酶浓度0.05（成团成片建议离心后铺板消化，短时间内再次团聚厉害的，可来信沟通我司推荐步骤，实验验证中），血清，根据自己实验室能力，用到最好。
悬浮转染：很多技术老师都认为是个难题，丁香园有老师介绍很久前的办法逆转录病毒成功率高，到目前成功案例不多，各位老师可查相关文献，目前认为上述团聚厉害也是转染关键。虽然目前有几种团聚解决办法，我们也在验证评测中，欢迎与各位老师交流细节经验。
冻存步骤：建议头天配液，第二天用。
复苏：血清建议浓度调高，冻存步骤如无问题，细胞几周后可爬出，
免疫细胞共聚焦：
通过对悬浮转染实践并统计中，我司增强细胞贴壁试剂很快时间可将细胞驯化成贴壁细胞，成像优势很大，文献有提到黏连蛋白可用在该实验中，该试剂保存要求高，实施难度高，成本高，成功率低，重复难度大。欢迎各位老师有这方面实验的，来信沟通交流。

实验验证中：JURKAT质粒转染，鼠淋巴细胞转染，这类细胞免疫保护要有老师有兴趣或有资料，我们非常有兴趣了解并多家实验室验证。实验结果共享。
该类细胞研究北京地区同行，要长期研究这类细胞，如能互信互利双方达成友好合作的实验室，试剂筛选比对统计，我司提供试用，协助用户评测并共享统计资料，筛选平稳试剂平台，或后期课题合作。经过十年生产销售，我司有些不错的细胞培养方面各种资源。
免疫血液类研究分子及蛋白方面研究实验室可来信题目标明。我们上门拜访。

国内细胞状态统计一些小建议-血清
高质量的血清：应该是细胞出现问题能解决问题，并能持续保证质量一贯性。
与很多老师意见：其他细胞都能养活，就这个细胞养不好。正好相反，建议评审条件正好相反。如能长期关注这种问题，筛选出的血清质量结果也是最可靠的，就像我们出现问题能想到的那款血清，为啥这款血清能够完成几乎所有问题解决，几十年质量一致性，批间差几乎为零。这种血清才是高质量血清。
欢迎与常年从事细胞质量要求高的实验室一起解决各种问题，目前技术、试剂、设计、方法已相对成熟。国内从从细胞建系开始的技术试验已经非常成熟了，我司目前目前跟踪统计的原代细胞建系思路设计及实验已经有几年了，真正的成熟还要做很多的工作。我司十年的基础实践统计，欢迎您的参与与提携。

20211015：我司在该类细胞转染逆转录病毒技术上有些些突破，有兴趣老师可来信注明，如有时间重复我们试剂方法实验，要求，细胞来源明确，生长顺利（描述生长状态特性，细胞图片）。进口试剂耗材，状态一定要好，给出血清图片。经签保密协议公司授权后，可共享，所用试剂全部自有研发生产。也欢迎国内转染试剂有研发团队深入合作。高通量转染我司一直在做相关技术储备。


20211101：巨噬相关培养问题（初稿已总结好，案例还不多）：原代建系方面开始统计相关，有需要老师可来信注明，进口试剂耗材（国产试剂耗材用户等统计成熟了会公布）-两年培养经验-告知实验室名称（这样沟通较准确）-转染相关请注明，我们已有些技术突破，还在验证中。

20220622关于胰酶应用与团聚。团聚是这类细胞正常现象，特别是传代后容易团聚，按临床培养方法，不弃液培养，后期收获前细胞，细胞会成单个状态。该方法后面要继续传代培养，前期应该还会团聚。也说明上清回输方法可行性。通过对团聚类细胞统计（包括原代无血清类）也说明细胞培养过程中某些营养缺乏。胰酶用途目的是：转染前、冻存前我们把团聚细胞通过化学作用使细胞成单个目的，转染前、冻存前我们叫优化细胞状态，为使后面实验更加顺利，单个在转染前冻存前消化开，可与团聚状态做比较实验，单个细胞状态后续实验效果会更好。


20221109  淋巴瘤类免疫细胞经过国内实验室长期培养后，有些习惯性、技术、试剂层面引起的细胞复苏恢复困难问题，经过十几年统计，给些建议参考，具体问题可描述上下操作步骤，保种级别试剂，血清加倍后，完全培养基翻倍加入培养瓶，放置培养箱，一周两周不动都可以，根据加培养基代谢情况换液，保种试剂建议在平行曲线比较培养中测试下，不换液，看下细胞增殖情况，我们理解的保种级别试剂，主要是血清，在后面一两天还在增殖中。这种评测过的血清，上这类难养细胞比较稳妥。这个实验堆后面难养细胞培养恢复有意义。案例用户新手，习惯性复苏培养已放弃，上述实施后救助成功。

20230524该类细胞转染统计参考：金标准推荐LIPO3000-反向法（具体问题可讨论），PEI-反向法（理论上是可行的，需更多理由案例可讨论）我司无PEI相关产品已推出，预实验不理想（减少毒性目的还比较理想，转染效果不理想，进一步提升研发中，有需研发试用机构来信告知）欢迎国内研发机构留下信息。细工在该类细胞培养统计中，技术储备充足，该类培养中细胞团聚特性，与类器官，干细胞，悬浮皿团聚有类似特点，相关解离产品也在统计中，也是转染中解决团聚后，提升细胞质量，提高转染效率较关键因素。
关键词：培养中解离产品（反向驯化），无酶消化产品，优化酶消化产品（细胞工厂已有多年工业应用），磷酸钙转染优化产品，无钙培养基应用等，含硒培养基开发。

20250119

冗余试剂设计，对抗不确定性-免疫类细胞科研验证合作
验证过程，各类难养系、原代部分（特别是肿瘤细胞建系）
免疫类细胞验证合作：该类细胞从样本库研究、临床研究、细胞系培养，细工都有些基础培养中一些痛点统计，常规培养参考意义强，在验证过程中冗余试剂与技术统计都会有些经验参考，包括冻存复苏统计活率更好也可用下细工方案做备份体系。
血液类离体处理细工推荐无外力影响培养，（避免机械力、钝力、化学成份干扰）通用体系常规建议培养，再通过简易单克隆方法，克隆目的细胞，可反复克隆，精准拿到拿到目的细胞。
转染：目前大牌很多款都可顺利转染(大牌优略可讨论），解决成团成片是关键点。
冻存复苏：对原代免疫类研究，培养顺利，转染成功都相对容易，冻存复苏关键点细工推荐备份方案，在样本库研究，该类系保种都有积极意义。
首代培养难点：临床检验科室，血液生化检测设备厂家有合作的科研目的，可留言告知。相关科研合作。钙化关系：血管钙化、肺钙化、动脉钙化、乳腺钙化、甲状腺钙化、、前列腺钙化、心脏瓣膜钙化、海默