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- 类器官-免疫细胞共培养模型
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- 2026年04月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
晶莱生物
- 服务名称：
类器官-免疫细胞共培养模型
- 规格：
元
肿瘤类器官-免疫共培养模型由三大核心组分构成：肿瘤细胞、免疫细胞及细胞外基质（ECM）（图1）。肿瘤细胞可来源于患者或已建立的癌细胞系，其中患者来源类器官（PDOs）具有更高的患者特异性关联。免疫细胞组分可包含外周血单个核细胞（PBMCs）、肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）或经工程化改造的免疫细胞（如CAR-T细胞），用于探索特定免疫应答。ECM通常由Matrigel或胶原蛋白等水凝胶构成，既能提供三维结构支撑，又可调控细胞行为特征。为更好模拟体内复杂环境，共培养模型可整合癌症相关成纤维细胞（CAFs）、髓源性抑制细胞（MDSCs）或内皮细胞等肿瘤微环境组分。这些组分的精准筛选与组合对准确模拟肿瘤-免疫互作机制、探索癌症免疫治疗策略具有决定性作用。
1、类器官准备
1）提前一周，复苏培养类器官至状态良好；
2）取合适数量类器官，使用预冷PBS清洗数次，去除大部分基质胶；
3）使用培养基重悬类器官。
2、PBMC分离和类器官共培养
（1）外周血在无菌环境下，使用添加EDTA-K2的真空采血管采集，运输保存；
（2）将新鲜静脉血与PBS缓冲液1：1 稀释，轻轻混匀待用。
（3）添加4ml细胞分离液（Absin abs930），缓慢加入静脉血混合物8ml，静置待用。
（4）2000rpm 离心20min，在此过程中升降速度降至1，避免产生细胞融合。
（5）此时观察到15ml离心管为4层，轻轻吸取第2层白色悬浮物于15ml 离心管，混匀待用。
（6）1500rpm 离心10分钟，在此过程中升降速度降至1，避免产生细胞融合，弃上清。
（7）添加适量T细胞无血清基础培养基静置培养观察。T细胞无血清完全培养基的配置：向T细胞无血清基础培养基里添加IL-2（Absin abs05543）200-500单位/ml (刺激T细胞生长与增殖)， CD3/CD28磁珠（Absin：abs160019）3ug/ml（激活T细胞）。
5）使用T细胞无血清完全培养基，悬浮调整至合适浓度，96孔板，每孔约加入5*105 活T细胞，100uL体积；
6）重悬类器官混合液，分别加入等量的样至96孔板中，至总体积200uL。
3、培养观察
1）D0观察记录类器官和T细胞状态；
2）37℃，5% CO2条件下培养，每日连续观察；
3）D3吸出100uL培养上清，加入100uL新培养基，同时加入（处理抗体或药物）使至终浓度100nM（如果D3已出现显著差别，则记录大视野明场形态，终止实验）；
4）观察至实验组间差异显著，拍照记录大视野细胞明场形态；
5）细胞上清保存用于后续检测
4. 腹膜癌类器官与TIL细胞共培养
TIL细胞可被腹膜癌类器官激活，并对类器官具有杀伤作用。14h后，类器官的荧光信号明显下调。
TIL细胞（绿色）杀伤腹膜癌类器官（红）
5. 乳腺癌类器官与TIL细胞共培养
Caspase-3/7（绿色）标记乳腺癌类器官，共培养4h后凋亡细胞显著增多。
成像分析用于测定共培养物中类器官凋亡情况
3. 胃癌类器官与NK细胞共培养
NK细胞（红色，细胞膜，DIL）可被胃癌腹水来源的类器官（蓝色，细胞核，Hoechst 33342）激活，并对类器官具有杀伤作用。12h后，NK细胞的荧光信号显著上调，24h后类器官的荧光信号明显下调。
NK细胞（红）杀伤胃癌类器官（蓝）
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文献和实验Nature 三连发：竞争消除，有你没我，论癌细胞的「霸道行为」
克隆如何发挥其与野生型肠道干细胞相比的竞争优势，并最终为靶向治疗结直肠癌奠定了基础。 图片来源: Nature主要研究内容 Apc 突变体具有明显的竞争优势 首先，研究人员建立了 WT 和 Apc−/−的共培养体系，他们发现，WT/WT 共培养物的相对贡献随着时间的推移基本保持不变；而 Apc−/−类器官在与 WT 类器官共培养物中迅速占主导地位。进一步的分析发现，这种现象不仅仅是由不同的 Apc−/−和 WT 的增殖比率造成的，而且与 Apc−/−细胞共培养时
人类大脑疾病。由于脑类器官经历的培养与人类胎儿大脑的发育步骤相似，所以它们适用于模拟具有实际病因的神经发育障碍；同时，通过模拟脑类疾病的进展，可以实现药物的筛选。 根据统计数据，约 5% 的世界人口患有神经发育障碍。明确神经发育障碍的原因，并建立适当的临床前模型，对于开发新的治疗方法是非常重要的。小头畸形症就是使用脑类器官模拟脑部疾病的早期例子。小头症脑类器官来源于一名小头症患者的 iPSCs，该患者在 CDK5 调节亚单位相关蛋白 2(CDK5RAP2)存在突变，这被假定为小头症的风险
后，转移至 37℃，5%CO2 的培养箱中孵育 10min，使 Matrigel 固化。 12、向每个孔中缓慢滴加 500μl 预热的类器官培养基，确保基质胶被完全覆盖。放于 37℃，5%CO2 的培养箱中培养，每 2-3 天更换培养基。在类器官培养 15 天后可以考虑传代。 图 2. 显微镜下不同患者来源的 HPA 类器官形态及 SOX2、SOX9、TACSTD2、KRT8/18、CD55、E-CAD 标记物的表达均有不同程度的差异【3】 垂体（瘤）类器官模型的建立方式 垂体（瘤）体外模型
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