- ￥2990
- YBio/钰博生物
- YB79300y-14
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Yellow Head Virus(YHV)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Yellow Head Virus (YHV) SYBR qRT-PCR Kit
低温运输，-20℃保存
黄头病毒（Yellow Head Virus,YHV）是一种 RNA 病毒，黄头病是对虾的 主要病害之一，病毒感染的靶器官为虾的鳃、触角腺、造血组织、淋巴器官等。 病虾发病初期摄食量增加，然后突然停止吃食，在 2-4 天内会出现临床现象并死 亡。许多濒临死亡的虾聚集在池塘角落的水面附近，其头胸甲因里面的干胰腺发 黄而变成黄色，对虾体色发白，鳃棕色或白色，濒临死亡的虾其外胚层和中胚层 发源的器官会出现全身性的坏死，已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一， 因此黄头病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于 PCR 原理开发。它具有下列特点：
1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据黄头病毒 RNA 的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 基于染料法 qRT-PCR 检测，灵敏度比常规 RT-PCR 高 10-100 倍，可以达到至少1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 qRT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：
| 成分 | 编号 | 小纸盒包装 |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 试剂一 | 500 μL（棕色管） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 试剂二 | 100 μL（红盖） |
ROX 染料 I，50× |
试剂三 | 20 μL（棕色管） |
| ROX 染料 II，50× | 试剂四 | 20 μL（棕色管） |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 试剂五 | 1mL（黄盖） |
| 黄头病毒RNA 染料法qRT-PCR 引物混合液 | 试剂六 | 100 μL（白盖） |
| 黄头病毒RNA染料法qRT-PCR阳性对照（1×10E8拷贝/μL） | 试剂七 | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 一份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供 RNA 片段作为阳性对照。
自备试剂：样品 RNA。
使用方法：一、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入 45 μL荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
2. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
3. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
5. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。
6. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
三、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
7. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液做模板）。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
8. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加）：
| 成分 | N+2 个制备 所得样品 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性 对照（2-7 管） |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 10μL | 10μL | 各 10μL |
| 黄头病毒染料法 qRT-PCR引物混合液 | 2μL | 2μL | 各 2μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各 0.4μL |
| 样品制备所得 RNA 模板（来于第 8 步） | 5.6μL | - | - |
| 稀释所得 6 个阳性对照 （来于第 6 步） |
- | - | 各 5.6μL（2 号样到 2 号管， 3 号样到 3 号管…） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
注:需使用 ROX 染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX 染料 II 的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的 Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。不需要使用 ROX 的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。
- 上机后按下面参数进行 RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| PT（逆转录） | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| qPCR反应（40个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集SYBR通道的荧光信号） |
四、数据处理
10.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于 或等于 37。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于 或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 37 则为阴性，如果小于或等 于 30 则为阳性。如果在 30-37 之间，则重复一次。
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Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
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所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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