人类嗜T淋巴细胞病毒1型前病毒PCR试剂盒

产品简介：
人类嗜 T 淋巴细胞病毒１型（Human T-lymphotropic Virus 1,HTLV-1）是一 种感染后可导致血癌或其他转移癌的 RNA 病毒，在体内主要感染 CD4+ T 淋巴细胞， 可引起成人 T 淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV-Ⅰ相关脊髓病（HTLV-Ⅰassociated myelopathy，HAM/热带痉挛性下肢瘫，tropical spastic paraparesis TSP）及色 素层炎（uveitis），主要通过输血、针头、性行为、母子传染。HTLV-I 病毒是爱滋病 毒 (HTLV-I) 的远亲，但 HTLV-I 和爱滋病的发生没有任何关连。目前各捐血中心以 酵素免疫法全面筛检 HTLV-I 病毒。 患者的白血病细胞内有 HTLV 前病毒 DNA 的整合，所以 HTLV-１前病毒 DNA 水 平可以作为病毒载量之外的另一标志物。本产品就是针对此需求而建立的一种检测 HTLV-１前病毒 DNA 的 PCR 检测方法，本试剂盒具有下列特点：
1. 根据 HTLV-1 PX 基因设计的针对 HTLV-1 前病毒的 PCR 引物，专一性强。
2. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
3. 试剂盒有阳性对照，别于区分真假阳性。
4. 本试剂盒足够 50 次 40uL 反应体系的常规 PCR。
5. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（本色盖）
HTLV-1 前病毒PCR 引物混合液	13-27110yw	100 μL（白盖）
HTLV-1 前病毒 PCR 阳性对照	13-27110pc	50 μL（黄盖）
天净沙 DNA 释放剂试用装	130982	50 次（试用装）
使用手册	13-27110sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个样品提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 本试剂盒提供的 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液作为 PC，但需要加上一定量的水使样品总体积跟每 次制备要求的总体积一样（参考所选用 DNA 提取试剂盒手册），如果每次制备需 要 200μL 样品，则加上水后的 PC 起始总体积也必须是 200μL。PC 制备得到的 样品为 PC 样品。用水作为 NC，制备得到的样品为 NC 样品。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。 也可以选购本公司的相关产品。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
HTLV-1 前病毒 PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品（包括 PC 和 NC）	各 18 μL	-	-
超纯水	-	18 μL	-
HTLV-1 前病毒 PCR 阳性对照 10000 倍稀释液	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	4 分钟
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	50℃	30sec
	72℃	60 秒
最后延伸	72℃	10 分钟

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结 束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 230bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感 染。